Un procedimiento habitual para la determinación de proteínas es el ensayo del colorante de Bradford. Según este método, la proteína se trata con un colorante que cambia su color de pardo a azul cuando se une a la proteína. La intensidad del color azul (medido por la absorbancia de la luz a una longitud de onda de 595 nm) es proporcional a la cantidad de proteína presente. Determinar por mínimos cuadrados la ecuación de la recta, y = mx + b, con un número razonable de cifras significativas. Comentar los resultados obtenidos teniendo en cuenta el valor del coeficiente de determinación Trazar un gráfico en el que aparezcan los datos experimentales y la recta que mejor se ajuste a los citados datos. Justificar el trazado que se realice. Una muestra problema de proteína dio una absorbancia de 0,973. Calcular el número de microgramos de proteína en el problema, con un número razonable de cifras significativas.

1. Determinación de una proteína por medidas de
absorbancia
Ejercicios numéricos de Técnicas Instrumentales

2. Un procedimiento habitual para la
determinación de proteínas es el
ensayo del colorante de Bradford.
Según este método, la proteína se
trata con un colorante que cambia
su color de pardo a azul cuando se
une a la proteína. La intensidad del
color azul (medido por la absorbancia
de la luz a una longitud de onda de 595 nm) es proporcional a la
cantidad de proteína presente.
1. Determinar por mínimos cuadrados la ecuación de la recta, y = mx + b,
con un número razonable de cifras significativas. Comentar los resultados
obtenidos teniendo en cuenta el valor del coeficiente de determinación
2. Trazar un gráfico en el que aparezcan los datos experimentales y la recta
que mejor se ajuste a los citados datos. Justificar el trazado que se realice.
3. Una muestra problema de proteína dio una absorbancia de 0,973.
Calcular el número de microgramos de proteína en el problema, con un
número razonable de cifras significativas.
Proteína (µg) A (a 595 nm)
0,00 0,466
9,36 0,676
18,72 0,883
28,08 1,086
37,44 1,280

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La representación
de los puntos
experimentales es
esta (en el eje Y, la
absorbancia; en el
X, la masa de
proteína en µg)
Proteína
(µg)
A (a 595
nm)
0,00 0,466
9,36 0,676
18,72 0,883
28,08 1,086
37,44 1,280
mP (µg)
A

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Proteína
(µg)
A (a 595
nm)
0,00 0,466
9,36 0,676
18,72 0,883
28,08 1,086
37,44 1,280
Nótese que para una masa
de proteína igual a 0 se
obtiene una absorbancia
considerable. Eso se debe
a que el blanco contiene el
colorante, el cual es de
color pardo

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Proteína
(µg)
A (a 595
nm)
0,00 0,466
9,36 0,676
18,72 0,883
28,08 1,086
37,44 1,280
Se ajustan los
puntos de la recta
con un programa de
mínimos cuadrados.
Se obtiene esta
ecuación de la recta
A = 0,0218 mP + 0,471
r = 0,999 r 2= 0,999
mP (µg)
A

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Proteína
(µg)
A (a 595
nm)
0,00 0,466
9,36 0,676
18,72 0,883
28,08 1,086
37,44 1,280
Se dan tres cifras
significativas
porque los datos
experimentales
contienen entre 3 y
4. Lo coeficientes
de ajuste son muy
buenos
A = 0,0218 mP + 0,471
r = 0,999 r 2= 0,999
mP (µg)
A

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Proteína
(µg)
A (a 595
nm)
0,00 0,466
9,36 0,676
18,72 0,883
28,08 1,086
37,44 1,280
mP (µg)
A
También se podría
haber representado
en papel milimetrado

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Proteína
(µg)
A (a 595
nm)
0,00 0,466
9,36 0,676
18,72 0,883
28,08 1,086
37,44 1,280
mP (µg)
A
Para aprovechar bien todo el papel, estas
son las relaciones de escala adecuadas
16 cm
8 cm
16 cm
(37,44 – 0) μg
8 cm
(1,28 - 0,466)

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Proteína
(µg)
A (a 595
nm)
0,00 0,466
9,36 0,676
18,72 0,883
28,08 1,086
37,44 1,280
mP (µg)
A
Redondeando los
cocientes por abajo…
16 cm
8 cm


0,4 cm/μg 9,8 cm/unid.
16 cm
(37,44 – 0) μg
8 cm
(1,28 - 0,466)

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Proteína
(µg)
A (a 595
nm)
0,00 0,466
9,36 0,676
18,72 0,883
28,08 1,086
37,44 1,280
mP (µg)
A
Al representar en el eje Y hay que tener en cuenta
que no conviene empezar desde 0 porque el
primer valor (0,466) está muy alejado del 0.
Empezaremos por 0,466. Este valor hay que
restarlo de todos los valores de A antes de hacer la
multiplicación por 9,8
16 cm
8 cm


0,4 cm/μg 9,8 cm/unid.
16 cm
(37,44 – 0) μg
8 cm
(1,28 - 0,466)

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Proteína
(µg)
A (a 595
nm)
0,00 0,00
3,74 2,06
7,49 4,09
11,23 6,08
14,97 7,98
mP (µg)
A
Multiplicando por los factores de escala estos
valores (los del eje Y, previamente corregidos
restándoles 0,466) se obtienen estos puntos a
representar expresados en cm del papel
milimetrado
16 cm
8 cm
0,4 cm/μg 9,8 cm/unid.

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Proteína
(µg)
A (a 595
nm)
0,00 0,00
3,74 2,06
7,49 4,09
11,23 6,08
14,97 7,98
mP (µg)
A
Esta es la representación

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Cálculo de la mP en la muestra

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• La absorbancia de la proteína de la muestra problema es 0,973
• Sustituyendo este valor en la ecuación de la recta:
Cálculo de la mP en la muestra

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• La absorbancia de la proteína de la muestra problema es 0,973
• Sustituyendo este valor en la ecuación de la recta:
Cálculo de la mP en la muestra
A = 0,0218 mP + 0,471

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• La absorbancia de la proteína de la muestra problema es 0,973
• Sustituyendo este valor en la ecuación de la recta:
Cálculo de la mP en la muestra
A = 0,0218 mP + 0,471
0,973 = 0,0218 mP + 0,471

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• La absorbancia de la proteína de la muestra problema es 0,973
• Sustituyendo este valor en la ecuación de la recta:
Cálculo de la mP en la muestra
A = 0,0218 mP + 0,471
0,973 = 0,0218 mP + 0,471
mP = 23,0 μg
Se da el resultado con el
mismo número de cifras
significativas que tienen la
pendiente y la ordenada en
el origen

18. Más problemas en
Ejercicios de Técnicas Instrumentales en Medio Ambiente
Fundamentos teóricos en
Curso de Técnicas Instrumentales en Medio Ambiente
(especialmente en Fundamentos de Quimiometría)

19. Más teoría, ejercicios y prácticas de
Química General, Química Inorgánica Básica,
Química Orgánica Básica, Química Física,
Técnicas Instrumentales…
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