Practico bacteriologia

1. Dpto. de Bacteriología y Virología
Curso Bases Científicas de la Patología 2023
Práctico Cocos Gram positivos
Identificación de S. aureus y estudio de la susceptibilidad
Observación al microscopio
Podrán observar la morfología y agrupación de un extendido a
partir de la colonia teñida con Gram. Tendrá para observar S.aureus
y S. pyogenes.
Se recomienda observar el color y pensar cómo está compuesta la
pared bacteriana en este caso. Observe también la forma (coco,
bacilo o espiroqueta) y cómo se agrupan.
Observación de cultivos
Tendrá para observar S. aureus y S. pyogenes en medio pobre (TSA) y
medio rico (agar sangre). Observe en que medio crece cada uno y
discutan en grupo los requerimientos nutricionales (exigente o no
exigentes).
También pueden observar la forma de las colonias, los límites la
producción de pigmento, etc.
Catalasa
Permite detectar la presencia de la enzima
catalasa, que produce H2O y O2 a partir de
H2O2.
Procedimiento: suspensión de colonias sobre
una gota de peróxido de hidrógeno (H2O2) al 3%
▪ Resultado positivo: Aparición instantánea de
burbujas
▪ Resultado negativo: No se observan burbujas

2. Clumping factor
Permite detectar la presencia de esta enzima que tiene
Staphylococcus aureus.
Esta enzima ligada a la pared bacteriana reacciona directamente
con el fibrinógeno generando un cambio que causa un precipitado
en la pared bacteriana. Si en la suspensión hay
otras bacterias de S.aureus se aglutinan.
Se obtiene un resultado positivo si se forman
grumos cuando se realiza la mezcla.
Procedimiento: En una lámina de vidrio se
coloca una gota de suero fisiológico y allí se
emulsiona una colonia del microorganismo a
estudiar hasta lograr una suspensión lechosa.
Al lado se agrega una gota de plasma citratado
de conejo y se mezcla luego con la suspensión bacteriana.
▪ Resultado positivo: formación de grumos.
▪ Resultado negativo: no se forman grumos. Este resultado se debe
confirmar con prueba en tubo.
Coagulasa en tubo: Esta prueba no la realizarán en el práctico.
Permite detectar la coagulasa libre que actúa mediante la formación
de un complejo con un factor sérico activado (CRF) que es una
molécula de trombina modificada, el cual reacciona con el
fibrinógeno formando el coágulo de fibrina.
DNAsa
Permite detectar la presencia de enzimas capaces de clivar los
enlaces fosfodiéster de la cadena de ADN, llamadas
desoxirribonucleasas o DNAsas.
Procedimiento: Se utiliza un medio sólido que presenta ADN
altamente polimerizado combinado con verde de metilo, dando
una coloración verde al medio. Se siembra con asa una estría o una
moneda y se incuba 18-24 h a 35-37 ºC.
▪ Resultado positivo: Halo transparente alrededor
de la siembra. La acción de la DNAsa destruye el
complejo ADN-verde de metilo, lo que provoca
la decoloración del medio.

3. ▪ Resultado negativo: No se observa un halo transparente, el
medio permanece verde.
Antibiograma por disco difusión de Kirby y Bauer
A partir de un inóculo bacteriano con una turbidez Mc Farland 0,5
(que equivale 1 x 108
UFC /mL) sembrarán una placa de agar Muller
Hinton en 3 direcciones estriando muchas veces para obtener un
crecimiento confluente.
Luego colocarán los discos impregnados con antibióticos.
En S. aureus, ¿van en cualquier lugar de la placa los discos o algunos
hay que colocarlos de forma estratégica?
Se incuba en estufa a 35 grados durante 24 horas y al otro día se
miden los diámetros de los halos de inhibición. Tendrán en el EVA
las fotos con los resultados para medir e interpretar los resultados.