.

1. Laboratorio en Autoinmunidad
Yeny Acosta-Ampudia, MSc, PhD
Centro de Estudio de Enfermedades Autoinmunes
Universidad del Rosario

2. Auto-
anticuerpos
Diagnóstico
Pronóstico
Seguimiento
Síntomas
clínicos
Papel del laboratorio en Reumatología

3. Evolución histórica de los métodos de Inmunodiagnóstico
1948
Células LE
1957
Inmunofluorescencia
1995
Métodos Monoplex
automatizados
EIA, FIA, LIA, RIA
2003
Métodos Multiplex
line-blot
2006
Métodos Multiplex
Microarray
2009
Inmunofluorescencia
indirecta automatizada

4. Clasificación de métodos para detección y medición de
autoanticuerpos
Primera generación-monoplex
Inmunofidusión doble
Fijación de complemento
Inmunofluorescencia indirecta
Aglutinación pasiva
Radio-inmunoprecipitación
Western blot
Segunda y tercera generación-monoplex
Radioinmunoensayos
Ensayo inmunoenzimático
Inmunoblot
Inmunodot
Quimioluminiscencia
Ensayo fluorimétrico
Multiplex
Microperlas
Tozzoli et al. Clin Chem Lab Med 2013; 51(1): 129-138

5. Razones de revolución tecnológica en el campo de la
autoinmunidad
• Incremento en el conocimiento de la fisiopatología y la función
de diagnóstico de autoanticuerpos
• Perfeccionamiento de los procedimientos para la identificación y
la purificación de autoantígenos
• Determinación cuantitativa de autoanticuerpos por los sistemas
analíticos automatizados
• Desarrollo de tecnologías proteómicas

6. Arrays de autoantígenos para detección de autoanticuerpos
Membrana
Nucleares
Citoplasmáticos
Mitocondrias
Fosfolípidos

7. Apoyo Formato Sistema de detección Autoanticuerpos
Rendimiento
(test/hora)
Portaobjetos Microspot Quimioluminiscencia 115 ~10.000
Portaobjetos Microspot Fluorescencia 196 ~10.000
Portaobjetos Microspot Fluorescencia 650 ~10.000
Portaobjetos Microspot Fluorescencia 225 ~10.000
Microplaca Microspot Colorimetría 15 ND
Membrana Nitrocelulosa Microspot Colorimetría 30 ND
Membrana Nitrocelulosa Line-blot Colorimetría 15 ~50
Membrana Nitrocelulosa Line-blot Colorimetría 13 ~50
Membrana Nitrocelulosa Line-blot Colorimetría 11 ~50
Membrana Nitrocelulosa Nanodot Quimioluminiscencia 10 ND

8. Zhu H. et al. Genomics Proteomics Bioinformatics. 2015. 13:210-218

9. NALIA- nanoensayo luminométrico múltiple
<20 IU/ml de anti-dsDNA
Ro (98%), La (93%), Sm (97%), RNP (97%)

10. Tecnología de microarray espectral
Luminex
Citometría de Flujo
¿Epítopes conformacionales?

11. Sistema Fabricante Perfiles de autoanticuerpos
FIDIS BMD, francia ANA (9), Artritis Reumatoide (2), Vasculitis (2), Enfermedad Celiaca (3), Tiroideos(2)
Quanta plex Inova, España ANA (8), Vasculitis (2), Enfermedad Celiaca (3)
Athena Multi-Lyte Zeus, Estados Unidos ANA (10), Vasculitis (3), Enfermedad Celiaca (2), Tiroideos (2)
Bioplex 2200 Bio-Rad, Estados Unidos ANA (13), ANCA (3), CCP (1), APS (2), Enfermedad Celiaca (3)
Rouquette A-M. et al. Am J Clinical Pathol 2003; 120:676-81
Giovanella L. et al. Head Neck 2011
Shovman O. et al. Autoimmunity 2005; 38:105-9
Ventajas sistemas Multiplex
Plataformas multiplex comerciales

12. Plataforma automatizada de pruebas IFI basada en células y
ensayos multiplex-AKLIDES
Annika Willitzki et al. Clinical and Developmental Immunology. 2012

13. Tecnología para detectar nuevos autoantígenos
PhIP Seq
William H & Lawrence Steinman. Nat Biot 2001. 29, 500-502

14. Anticuerpos Antinucleares
Armonización y estandarización de pruebas de autoinmunidad
• Anticuerpos frente a antígenos intracelulares
• Dilución de partida
• Elección del titulo: 1:40, 1:80
• Algoritmo diagnóstico
Es esencial que este fuerte impulso innovador se traduzca en la práctica
clínica de manera coordinada para evitar confusiones y el riesgo de
errores potencialmente perjudiciales para el paciente.

15. Gracias