Este documento describe el aislamiento de levaduras tolerantes al alcohol y hongos celulolíticos. Se realizó el aislamiento de levaduras a partir de muestras de fermento de guayaba y su posterior selección en medios con diferentes concentraciones de alcohol. También se aislaron hongos celulolíticos a partir de muestras de suelo y su identificación en medios con carboximetilcelulosa. Los resultados mostraron un 100% de levaduras tolerantes al alcohol y la degradación de polisacaridos por parte de los

1. FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
MAESTRÍA EN BIOTECNOLOGÍA
MICROBIOLOGÍA
Carolina Arango Rivas
Escilda Rodríguez Calonge
Dario Gonzalez
AISLAMIENTO DE LEVADURA
TOLERANTE AL ALCOHOL Y HONGO
CELULOLÍTICO

2.  Inhibición de la
multiplicación celular
 Efecto letal generalizado
para las células
Etanol
Mathews y Van Holde, 1998;Stryer, 1993)
LA TOLERANCIA A ETANOL
PRINCIPALES ASPECTOS A EXPLORAR EN LAS
CEPAS ETANOLOGÉNICAS Y LA INVESTIGACIÓN DE
NUEVOS MECANISMOS PARA EL MEJORAMIENTO
DEL PROCESO DE PRODUCCIÓN
Tóxico microorganismos fermentadores
Concentraciones limitadas
Acumuladas en el proceso de
fermentación
Proporción de etanol producido por el
organismo etanologénico
Intima dependencia con el grado de
tolerancia de la cepa al alcohol

3. Levaduras
Grupo más importante de microorganismos
explotados para propósitos
industriales

4. Son capaces de utilizar una gran
cantidad de sustratos (glucosa,
fructosa, sacarosa)
Son mas resistentes al etanol y
presentan mayores rendimientos
Ricas en esteroles, por lo que
mantienen por mas tiempo su
actividad fermentativa
Menos probable la contaminación por
bacterias ácido lácticas
Kyyper, 2006

5. AISLAMIETO
Medio Sabouraud Fermento
de guayaba
Siembra agotamiento
Eleccióndecolonia
Siembra en YPD + alcoholDif. concentraciones
Observaciónyresultados

6. MEDIO
SABOURAUD
Se suspendieron 65 g de medio
deshidratado en un litro de agua destilada
Se calentó agitando frecuentemente y se
dejó dejar hervir durante 1 minuto,
evitando el sobrecalentamiento
Se esterilizó a 121°C durante 15 minutos
Se distribuyó en las cajas y se dejó enfriar a
temperatura ambiente antes de la
utilización
EL BAJO PH DEL MEDIO RESULTA FAVORABLE
PARA EL CRECIMIENTO DE LOS
HONGOS
+ antibiótico
1.

7. FERMENTO DE
GUAYABA
•Fermentaciones alcohólicas
espontáneas no se deben a una única
cepa de levadura, sino que es el
resultado de la acción combinada de
diversas especies de estas.
•Se sabe que es mas efectivo el uso de
cultivos autóctonos de levaduras ya que
se encuentran adaptadas a las
condiciones climáticas de la zona y a la
materia prima a fermentar.
2.

8. 3.
SIEMBRA POR
AGOAMIENTO
INCUBACIÓN A
35 °C POR 48
HORAS
Selección de
colonias de
mayor
crecimiento

9. 4.
MEDIO YPD +
ALCOHOL
Medio líquido YPD con sacarosa a diferentes concentraciones
de etanol (4 %, 6 %, 8 %) , 3 replicas por concentración
Se inocularon 100μl del inoculo (colonias previamente
seleccionadas) en 9ml de medio YPD.
Los cultivos se incubaron a 30°C y su monitoreo se realizó a
las 72 horas.
Determinación del nivel de
tolerancia a etanol
Glucosa 2%
Extracto de levadura 1%
Peptona 2%
Agar 2%
CRECIMIENTO

10. YDP + Alcohol diferentes concentraciones
4% 6% 8%
9ml 9ml 9ml
Inocuo de colonia seleccionada
en medio YDP
100 ul

11. RESULTADOS
100 % LEVADURAS
TOLERANTES AL
ALCOHOL
Burbujeo
(CO2) 4 % 6% 8%

12. CELULOSA
(Hendricks, et al, 1995) (Alexander, 1980)
Constituyente carbonado de las plantas superiores y
probablemente el compuesto orgánico más abundante
en la naturaleza.
RECICLAJE DEL MATERIAL VEGETAL
Descomposición de este
carbohidrato
Ciclo biológico del carbono
 Los microorganismos del
suelo que transforman
material vegetal (40-60% de
residuos de plantas) por
catabolismo llegan a la
formación de CO2 y su
liberación a la atmósfera.
Cambios en el número
Modificaciones en el contenido de materia
orgánica del suelo.
Información acerca del estado del suelo y su
productividad
Gran atención a los organismos que
participan en la descomposición de esta sustancia

13. explicación
Los métodos generales de la genética de levaduras especifican el uso de extracto de levadura
cerevisiae y otras levaduras.1Las levaduras crecen bien en un mínimo
medio que contiene sólo dextrosa y sales. La adición de
proteínas y de levadura hidrolizados de extracto de células permite un crecimiento más rápido
de manera que durante el crecimiento exponencial o log-fase, las células
dividir cada 90 minutos.
1
 Trichoderma reesei
 Phanerochaete chrysosporium,
 Fusarium solani,
 Penicillum funiculosum,
 Trichoderma koningii,
 Sporotrix sp.,
 Alternaria sp.,
 Geotrichum sp.,
 Rhizoctonia sp.,
 Trametes sp.,
 Paecilomyces sp. ,
 Mucor sp.,
 Cladosporium sp.,
 Bulgaria sp.,
 Chaetomium sp.,
 Helotium sp.,
 Aspergillus sp..
HONGOS
CELULOLÍTICOS
(Aubert, 1988)

14. Medio de cultivo
Composición
g/dm3
Agar CMC al
1%
Carboximetilcelulosa 10
Extracto de levadura 2,5
Peptona universal 2,5
Sulfato de amonio 0,5
Cloruro de calcio 0,5
Fosfato mono básico de potasio 0,1
Fosfato di básico de potasio 0,1
Agar pithagel 2,5
MEDIO CMC

15. AISLAMIENTO
AISLAMIENTO PRIMARIO
INCUBACIÓN
A 35 °C POR
3 DÍAS
Muestra de suelo 10 gr Solución salina al 0.89
InoculaciónenMedio
CMC
Selección de hongos

16. AISLAMIENTO SECUNDARIO
AISLAMIENTO
(Teather y Wood, 1982).
ROJO CONGO AL
1% (p/v) 15 min
retiró esceso
+ Na Cl 0,5 N
Inoculación en Medio
CMC
Revelación de H.
celulolítcos
INCUBACIÓN
A 35 °C POR
3 DÍAS
OBSERVACIÓN
DE HALOS

17. RESULTADOS
MICROORGANISMOS DEGRADADORES
Se pudo evidenciar la hidrólisis de polisacáridos por parte de los hogos
celulolíticos debido a que el colorante forma complejos con las moléculas
aún no hidrolizadas, facilitando así la diferenciación entre microorganismos
celulolíticos y no celulolíticos por la formación de zonas de aclaramiento
alrededor de las colonias
(Hendricks, et al., 1995)