Las células se diferencian a través de mecanismos epigenéticos como la metilación del ADN y las histonas. En los linfocitos B, estos mecanismos controlan la proliferación celular y la mutación de inmunoglobulinas. En el linfoma difuso de células B grandes, alteraciones frecuentes en genes epigenéticos como EZH2, CREBBP, EP300 y KMT2D desregulan estos procesos y contribuyen al fenotipo tumoral.

1. Las bases epigenéticas
del linfoma difuso de
células grandes B
Mauricio Lema Medina

2. Inspirado en conferencia
impartida por Ari Melnick en
Weill Cornell, NY, 03/2016

3. Epigenética
• La secuencia de DNA es el código genético.
• Todas las células del cuerpo tienen el mismo
DNA
• Qué programas de ese código ejecuta cada
célula es establecido por mecanismos
epigenéticos

4. –Ari Melnick
“La epigenética determina el programa que va a
ejecutar una célula específica, que la diferencia
de todas las otras”

5. El silenciamiento epigenético de la inmensa
mayoría de los genes, con la activación
específica de los genes determinantes es la
clave para que una célula diferenciada pueda
ejecutar su función

6. Mecanismos epigenéticos
• Existen muchos mecanismos epigenéticos
• Metilación de los CpG
• Metilación de histonas
• Acetilación de histonas
• Otros

7. DNA
Gen a transcribirPromotorEnhancer

8. DNA
Gen a transcribirPromotorEnhancer
La activación de la transcripción
de genes, INHIBE la proliferación
celular en los linfocitos B

9. DNA
Gen a transcribirPromotorEnhancer
La activación de la transcripción
de genes, INHIBE la proliferación
celular en los linfocitos B
La inactivación de la transcripción de
genes, ESTIMULA la proliferación
celular en los linfocitos B

10. Metilación de las CpG
DNA
Gen a transcribirPromotorEnhancer
Metilación de las CpG
por las DNMTs (1 y 3a)
La metilación de promotores silencia los genes…

11. Metilación de histonas en el
promotor…
DNA
Gen a transcribirPromotorEnhancer
La trimetilación de la lisina 27 de la Histona 3, silencia el promotor (H3K27me3)
La H3K27me3 silencia los genes…

12. Metilación de histonas en el
promotor…
DNA
Gen a transcribirPromotorEnhancer
La trimetilación de la lisina 4 de la Histona 3, estimula el promotor el promotor (H3K4me3)
La H3K4me3 estimula la transcripción de genes…

13. Metilación de histonas en el
promotor…
DNA
Gen a transcribirPromotorEnhancer
Las timetilaciones de H3K27 (inhibitoria) y H3K4
(estimulatorias) establecen un delicado equilibrio…
e H3K27me3 y K3K4me3 determina si hay actividad transcripcion

14. Metilación de histonas en el
promotor…
DNA
Gen a transcribirPromotorEnhancer
La trimetilación de la lisina 27 de la Histona 3, silencia el promotor (H3K27me3)
La EZH2 metila metila la H3K27

15. Acetilación de histonas en el
enhancer…
DNA
Gen a transcribirPromotorEnhancer
Los enhancers activan la transcripción cuando se
acetilan los residuos de lisina en la posición 27 de la
histona H3 (H3K27ac)
mono y dimetilación, pero no la trimetilación, de las H3K4. Estimulan la transcripción
H3K4me1/2

16. Metilación de histonas en el
enhancer…
DNA
Gen a transcribirPromotorEnhancer
La proteína KMT2D es una Histona Metil Transferasa
que se encarga de la mono-metilación del H3K4,
esencial para la función del enhancer.
La H3K4me1 es esencial para que el enhancer estimule la transcripción.
H3K4me1/2

17. Acetilación de histonas en el
enhancer…
DNA
Gen a transcribirPromotorEnhancer
Las proteínas EP300 y la CREBBP son HATs (Histone
Acetyl Transferases) que acetilan residuos de Lysina en
H3K27 y otros (en histonas, y otros cientos de targets)
sas de histonas (HATs) como la EP300 y la CREBBP estimulan la transcripción de
H3K4me1/2

18. Acetilación de histonas en el
enhancer…
DNA
Gen a transcribirPromotorEnhancer
El complejo BCL6+SMRT/HiDAC3 desacetilan la H3K27
a HiDAC3) inhiben la transcripción de genes por inactivación de lo
H3K4me1/2

19. Los linfocitos B deben mutarse para
construir las inmunoglobulinas
C:G U:G
Mis-match
AICDA
AICDA es “activation-induced cytidine deamninase”

20. Los linfocitos B deben proliferar para
responder a los estímulos inmunológicos
Centroblastos
Centrocitos (en el Centro Germinal, GC)
Linfocito B mutado
(con inmunoglobulinas)
AICDA Prolifera

21. Los linfocitos B deben proliferar para
responder a los estímulos inmunológicos
Centroblastos
Centrocitos (en el Centro Germinal, GC)
Linfocito B mutado
(con inmunoglobulinas)
AICDA Prolifera
EZH2
BCL6
KMT2D
EP300
CREBBP

22. Alteraciones epigenéticas en
DLBCL
• Mutaciones del EZH2
• Ocurren en 21% de los DLBCL del tipo Centro
Germinal
• La mitad son activantes (ie, Y641)
• Aumentan la metilación del H3K27 de los
promotores

23. Alteraciones epigenéticas en
DLBCL
• Mutaciones del EP300 y CREBBP
• Ocurren en 5-10% y 18-23% de los DLBCL,
respectivamente
• Son inactivantes
• Normalmente funcionan como HATs que activan los
enhancers por la acetilación de la H3K27
• También aceitan a muchas otras proteínas como
p53 y BCL6

24. Alteraciones epigenéticas en
DLBCL
• Mutaciones del KMT2D
• Ocurren en 23-27% de los DLBCL
• Son inactivantes
• Normalmente funcionan activando los
enhancers por la monometilación de los H3K4

25. Conclusiones
• El control epigenético de los linfocitos es
fundamental para su función normal.
• La desregulación epigenética es clave para el
fenotipo oncológico de los linfomas B del centro
germinal que se derivan de los centroblastos.
• Las mutaciones del EZH2, CREBBP, EP300, y
KMT2D son muy frecuentes, y pueden explicar el
fenotipo tumoral.

26. Lectura recomendada
Jiang Y, Melnick A. The Epigenetic Basis of
Diffuse Large B-Cell Lymphoma. Semin Hematol.
2015;52:86-96.