Este documento presenta el procedimiento para realizar pruebas cualitativas de carbohidratos en el laboratorio de bioquímica. Describe las pruebas de Molish, Benedict, Barfoed, Bial, Selliwanoff y para sacarosa y almidón, las cuales permiten diferenciar entre carbohidratos reductores y no reductores y reconocer carbohidratos específicos como pentosas y cetosas. El estudiante deberá llevar a cabo estas pruebas cualitativas, observar y explicar los resultados obtenidos,

1. UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS E INGENIERIAS
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PRACTICA N°
PRUEBAS CUALITATIVAS PARA CARBOHIDRATOS
OBJETIVOS.
 Reconocer la presencia de carbohidratos en una muestra problema mediante la prueba de
Molish.
 Diferenciar carbohidratos reductores de no reductores por su comportamiento frente al
reactivo de Benedict.
 Realizar ensayos cualitativos para el reconocimiento de carbohidratos específicos.
TEORÍA RELACIONADA.
PRUEBA DE MOLISH: El ácido sulfúrico concentrado hidroliza los enlaces glicosídicos para dar
monosacáridos que pueden ser luego deshidratados dando furfural y sus derivados. Estos productos se
combinan con α-naftol sulfonato, originando un complejo púrpura. Esta reacción es general para los
carbohidratos pero algunos otros compuestos orgánicos dan también furfural con ácido sulfúrico
concentrado.
PRUEBA DE BENEDICT: Es una modificación de la prueba de felhing, introducida por Benedict.
En ella se usa únicamente una solución, lo cual lo hace mucho más simple con la ventaja adicional de
que el reactivo es más estable que el de felhing. Esta prueba solo la dan los azucares reductores.
PRUEBA DE BARFOED: reactivo de Barfoed es débilmente ácido y solamente puede ser reducido
por monosacáridos. Si se deja hervir por largo tiempo existe la posibilidad de hidrolizar los disacáridos
dando así reacciones falsamente positivas. El precipitado de oxido cuproso es menos denso que en los
métodos previos y se recomienda dejar el tubo en reposo hasta que el precipitado sedimente.
PRUEBA BIAL PARA PENTOSAS. Cuando se calientan las pentosas en ácido clorhídrico
concentrado se forma furfural que se condensa con orcinol en presencia de iones fèrricos para dar un
color verde azuloso.
PRUEBA DE SELLIWANOFF. Las cetosas deshidratan más rápidamente que las aldosas dando
derivados del furfural que se condensan con resorcinol para formar un complejo rosado; por lo tanto
debe evitarse un calentamiento prolongado de la muestra que se está estudiando.

2. PRUEBA PARA SACAROSA. La sacarosa es el único disacárido común no reductor y por lo tanto
no reduce las soluciones alcalinas de cobre. Esta es hidrolizada en solución ácida y luego se ensayan la
glucosa y la fructosa resultante.
PRUEBA PARA POLISACÁRIDOS. Los polisacáridos contienen sólo un grupo reductor por varios
cientos o más residuos, así que en la práctica, no son reductores. La hidrólisis ácida libera los
monosacáridos constituyentes que luego son ensayados.
MATERIALES Y RECTIVOS
Estufa o calentador Reactivo de Molish
Pipetas de 5 y de 10ml. Acido sulfúrico concentrado
Beakers de 100 y 400ml. Reactivo de Benedict
10 tubos de ensayo. Reactivo de Barfoed.
Pinza para tubos de ensayo Reactivo de Bial.
Gradilla Alcohol Amilico.
Gotero Reactivo de Selliwanoff.
Papel tornasol Acido clorhídrico concentrado.
Soluciones de: glucosa, galactosa, ribosa, ara vinosa, Hidróxido de sodio 1M.
Sacarosa, lactosa, fructosa, almidón Solución de yodo.
Leche (traer)
PROCEDIMIENTO
Prueba de Molish: Agregue 5 gotas del reactivo de Molish a 1 ml de una muestra que contenga
carbohidratos (Leche). Añada cuidadosamente por las paredes del tubo 1ml de ácido sulfúrico
concentrado, hasta que se formen dos capas. Observe cualquier cambio de color en la interfase de los
dos líquidos.
Prueba de Benedict: Tome 3 tubos de ensayo; agregue al primero 0.5 ml de solución de lactosa, al
segundo 0.5 ml de solución de glucosa y al tercero 0.5 ml de solución de sacarosa. Adicione 0.5 ml del
reactivo de Benedict a cada tubo y colóquelos en un baño de agua hirviendo por 3 min. La formación
de un precipitado de color rojo ladrillo indica la presencia de azúcar reductor.
Prueba de Barfoed: Tome 3 tubos de ensayo; adicione al primero 0.5 ml de solución de galactosa, al
segundo 0.5 ml de solución de ribosa y al tercero 0.5 ml solución de almidón. Adicione 1 ml del
reactivo de Barfoed a cada tubo, hierva por 2 min y deje reposar. La formación de un precipitado de
color rojo ladrillo indica la presencia de monosacáridos.

3. Prueba Bial : Tome 3 tubos de ensayo; adicione al primero 0.5ml de solución de ribosa, al segundo
0.5ml de solución de arabinosa y al tercero 0.5ml de solución de almidón. Adicione 0.5 ml del reactivo
de Bial a cada tubo y caliente hasta que empiece a hervir, dejar enfriar y luego agregue 1 ml de alcohol
amilico y agite, la aparición de una coloración azul verdosa es prueba positiva es prueba positiva para
pentosas.
Prueba de Salliwanoff: Tome 3 tubos de ensayo; adicione al primero 0.5ml de solución de fructosa,
al segundo 0.5ml de solución de arabinosa y al tercero 0.5ml de solución de glucosa. Adicione 1ml del
reactivo de Selliwanoff a cada tubo. Caliente durante 1 min en un baño de agua hirviendo, la aparición
de un color rojo o rosado es prueba positiva para cetosas.
Prueba para sacarosa: A 2.5 ml de una solución de sacarosa agregue 3 gotas de ácido clorhídrico
concentrado, caliente durante 5 minutos en un baño de agua hirviendo, enfrié y agregue Hidróxido de
Sodio 1M hasta que la solución sea neutra o ligeramente alcalina (prueba con papel tornasol), divida la
solución hidrolizada en dos porciones y realice por separado las pruebas de Benedict y Selliwanoff.
Prueba para polisacáridos: Coloque 1ml de solución de almidón, añada 1 gotas de solución de yodo.
Observe la producción de un color azul. Caliente el tubo ¿Qué observa? Deje enfriar y observe
nuevamente, ¿Qué ocurre? Explique sus observaciones.
PREGUNTAS
1. Escriba cada una de las reacciones en las diferentes pruebas para carbohidratos.
2. Explique los resultados de cada una de las pruebas realizadas?
1. Explique estructuralmente, por que la maltosa es un azúcar reductor y por que el almidón no lo
es según sus observaciones
2. Consulte las enfermedades producidas por el mal metabolismo de los carbohidratos.
3. Por qué la celulosa a pesar de estar formada por moléculas de glucosa es insoluble en agua.
4. ¿por que la sacarosa es un azúcar no reductor?. Consulte las posibles estructuras de las
muestras problemas.
5. Consulte el fundamento de otras técnicas usadas para la determinación de la glucosa en el
laboratorio.
BIBLIOGRAFIA:
PLUMER, D.T. Introducción a la bioquímica práctica. Mexico. MaGraw- Hill Latinoamericana, S.A.
CONN, E y Stumpf, P.K. Bioquímica F.
LOPEZ, E y ANZOLA, C. Guías de laboratorio de Bioquímica. Facultad de ciencias. Universidad
Nacional de Colombia sede Bogota.