Este documento presenta un protocolo de laboratorio para extraer colesterol de la yema de huevo utilizando acetona como disolvente y determinar su presencia mediante la prueba colorimétrica de Liebermann-Burchard. El procedimiento incluye extraer el colesterol de la yema con acetona fría, centrifugando la mezcla para obtener dos extractos acetónicos ricos en triacilglicéridos y colesterol. Estos extractos son analizados con el reactivo de Liebermann-Burchard para identificar cual cont

1. UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS E INGENIERIAS
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PRACTICA Nº 13
EXTRACCIÓN Y RECONOCIMIENTO DE COLESTEROL DE LA YEMA DE HUEVO
OBJETIVOS
1. Extraer colesterol de la yema del huevo, utilizando acetona como disolvente.
2. Determinar cualitativamente la presencia de colesterol en la yema de huevo mediante un
método calorimétrico.
TEORIA RELACIONADA
Los lípidos presentes en la yema son de naturaleza variada, destacando los triacilglicéridos, el
colesterol y los fosfolípidos. Mediante una extracción fraccionada se pueden separar los menos polares,
solubles en acetona (triacilglicéridos y colesterol) de los más polares (fosfolípidos), que serían solubles
en disolventes como la mezcla cloroformo/metanol.
Los métodos analíticos para la determinación del colesterol se dividen en colorimétricos y enzimáticos.
De los primeros, el más popular es el de Liebermann-Burchard, en el que la reacción tiene lugar en un
medio ácido fuerte (ácido sulfúrico). La etapa inicial del proceso consiste en la protonación del grupo
hidroxilo del colesterol, seguido de su deshidratación para formar un ión carbonio 3,5-colestadieno. La
oxidación secuencial de este ión carbonio alílico por el sulfúrico produce un compuesto cromóforo, el
colestahexano-ác. sulfónico, que absorbe energía en la zona de la luz visible, a 410 nm.
MATERIALES
Vaso de precipitado 100 mL
Vaso de precipitado 50 mL
Pipeta de 5 mL
Agitador de vidrio
Tubos de ensayo (2)

2. PROCEDIMIENTO
1. Extracción de colesterol de la yema de huevo.
Cascar un huevo de gallina con precaución y separar la clara de la yema, teniendo cuidado de no
romper ésta. Decantar la clara y tomar 1 g de la yema, en un vaso de 50 ml. Añadir sobre la yema 5 ml
de acetona fría y agitar con la varilla de vidrio, hasta obtener una suspensión homogénea. Verter el
contenido en un tubo de centrífuga y centrifugar a 2000 RPM durante 10 minutos.
Concluida la centrifugación, retirar el sobrenadante con pipeta. Guardar el sobrenadante, al que
llamaremos extracto acetónico A1, y reextraer el sedimento con otros 5 ml de acetona, agitando con la
varilla y repitiendo la centrifugación. El nuevo extracto obtenido se llama extracto acetónico A2.
2. Reconocimiento de colesterol mediante la prueba de Liebermann-Burchard
Agregar a cada tubo una cantidad adecuada del reactivo de Liebermann-Burchard. Observar los
resultados. Que tubo presenta una coloración mas intensa?
Preguntas complementarias:
1. Dónde ha encontrado usted más colesterol, en la fracción A1 o en la A2? Por qué?
2. Consultar sobre los métodos enzimáticos para la determinación de colesterol.
3. Cuales son los valores de referencia para el contenido de colesterol en sangre humana.
4. Que relación existe entre el contenido de colesterol y el riesgo de contraer enfermedad vascular
arteriosclerótica.
BIBLIOGRAFÍA:
PLUMER, D.T. Introducción a la bioquímica práctica. México. MaGraw- Hill Latinoamericana, S.A.
CONN, E. y Stumpf, P.K. Bioquímica F.
LÓPEZ, E y ANZOLA, C. Guías de laboratorio de Bioquímica. Facultad de Ciencias. Universidad
Nacional sede Bogotá.