La Clínica Universidad de Navarra (CUN) es uno de los cinco centros de referencia a nivel nacional para la determinación del biomarcador K-RAS en pacientes con cáncer colorrectal metastásico en primera y segunda línea de tratamiento
La Clinica como centro de referencia para la determinacion del K-RAS
1. Nuestro papel como centro de referencia en la determinación del K-RAS ¿QUÉ ES EL K-RAS? La mutación de K-RAS es un evento precoz en el proceso de la carcinogénesis colónica. Su estado mutacional permite conocer, a priori, qué pacientes van a responder favorablemente a anticuerpos monoclonales frente al EGFR. Normalmente, la activación del EGFR promueve el crecimiento del cáncer. En presencia de K-RAS no mutado, las terapias anti-EGFR inhiben la progresión del cáncer bloqueando la actividad anti-EGRF. Sin embargo, K-RAS mutado interfiere en la eficacia de las terapias anti-EGFR. CENTROS DE REFERENCIA La Clínica Universidad de Navarra (CUN) es uno de los cinco centros de referencia a nivel nacional para la determinación del biomarcador K-RAS en pacientes con cáncer colorrectal metastásico en primera y segunda línea de tratamiento. Los hospitales que todavía no disponen de los recursos necesarios para hacer esta determinación genética pueden solicitar la realización del test al centro de referencia más próximo. El oncólogo remite la muestra al centro de referencia donde se procede a la extracción y análisis del ADN. Los resultados, tras ser validados, se envían al oncólogo en un corto plazo de tiempo, convirtiéndose estos en una importante herramienta para elegir el tratamiento adecuado. RESULTADOS Los resultados se expresan como K-RAS mutado (especificando la mutación) y K-RAS nativo. Las terapias anti-EGFR no han demostrado ningún beneficio en pacientes cuyos tumores presentan K-RAS mutado (alrededor del 40%). A la inversa, en pacientes cuyos tumores presentan K-RAS nativo tienen una gran probabilidad de beneficiarse de las terapias anti-EGFR. CONCLUSIONES La determinación del estado mutacional del K-RAS constituye un marcador predictivo para la respuesta al tratamiento basado en anticuerpos frente al EGFR en cáncer de colon metastásico, que requiere ser incorporado a la práctica clínica habitual. Su implementación en el ámbito asistencial es factible. Mª Carmen Gil y Maitane Robles Unidad de Genética Clínica El kit utilizado es “TheraScreen .K-RAS Mutation kit”, basado en la tecnología DxS ARMS Scorpions , que permite detectar siete mutaciones del oncogen K-RAS localizadas en los codones 12 y 13. Este método es muy sensible pudiendo detectar aproximadamente hasta un 1% de ADN mutado sobre un fondo de ADN genómico nativo. MATERIAL Y MÉTODOS El material debe ser un ADN genómico humano obtenido de muestras de cáncer colorrectal, extraídas de tejido fresco, congelado o incluido en parafina. Antes de la realización del test, el patólogo deberá evaluar la presencia de células cancerosas viables en la muestra. Más tarde se realiza la extracción de ADN partiendo de la muestra de tejido, mediante el sistema automatizado de Qiacube o bien con el kit manual NucleoSpin. Una vez obtenido y cuantificado el ADN genómico con el espectrofotómetro Nanodrop, se procede a preparar la placa para la técnica de RT-PCR. Tabla 1. Mutaciones de K-RAS detectadas por el kit DxS K K Grb-2 SOS K-RAS RAF MEK MAPK EGFR CRECIMIENTO PI3K SUPERVIVENCIA Tejido incluido en parafina Microtomo RT-PCR 7500 Resultados e interpretación Qiacube Nanodrop MUTACIÓN CAMBIO DE BASE Gly12Ala G G T>G C T Gly12Asp G G T>G A T Gly12Arg G GT> C GT Gly12Cys G GT> T GT Gly12Ser G GT> A GT Gly12Val G G T>G T T Gly13Asp G G C>G A C