Este documento presenta un laboratorio sobre marcadores de inflamación. Explica qué es la inflamación y tipos de marcadores inflamatorios agudos como la proteína C reactiva. Detalla actividades como pruebas para medir la proteína C reactiva y la procalcitonina, y buenas prácticas de laboratorio. El objetivo es que los estudiantes discutan la utilidad de los marcadores serológicos para diagnosticar inflamación aguda.

1. Semana 3 - Laboratorio 5
2023-2
Facultad de Ciencias de la Salud
Inmunidad e Infección
ME208

2. P5
Marcadores de inflamación
Facultad de Ciencias de la Salud
Docentes: M. Marzal y A. Paredes
MSc. Inmunología, Dr(c) Microbiología

3. LOGRO
Al finalizar el laboratorio, el estudiante
discute la utilidad de los marcadores
serológicos en el diagnóstico de
inflamación aguda.

4. Introducción
• Inflamación
• Tipos de Inflamación
• Marcadores de Inflamación
Actividades
1. Buenas prácticas de Laboratorio
2. Proteína C reactiva (PCR) y pruebas para medir PCR
3. Test de aglutinación en látex para PCR
4. Test para Procalcitonina
5. Buenas prácticas de Laboratorio
Temario

5. INTRODUCCION

6. • Clínicamente: Eritema, edema, dolor
y calor.
• Histológicamente: Edema e
infiltración de leucocitos en los tejidos
Inflamación

7. Inflamación
https://youtu.be/iVCXRa8FdP0
3 min

8. Marcadores de inflamación
Inflamación aguda Inflamación crónica
Células
• Infección: Neutrófilos,, eosinófilos,
mastocitos
• Macrófagos, linfocitos
Mediadores
químicos
• Complemento, kininas,
prostaglandinas, leucotrienos,
citocinas (IL-1, IL-6) de varias
células inmunes, IFN-γ de linfocitos
T.
• Proteína C Reactiva (PCR),
Amiloide sérico A (SAP),
fibrinógeno, proteína
quimiotáctica de monocitos (MCP-
1), óxido nítrico
• Citocinas de macrófagos y
linfocitos T.
• VCAM-1, ICAM-1, E-selectina
• Mieloperoxidasa (MPO), ROS
• Microalbuminuria
• Fosfolipasa A2, Cox-2
Lesión • Salpullido, pus, absceso • Salpullido, fibrosis, granuloma
Ejemplos
clínicos
• Absceso (cerebro, piel),
• Reacción alérgica (anafilaxis)
• Condiciones autoinmunes (lupus,
artritis reumática), fibrosis quística

9. Marcadores de inflamación aguda

10. ACTIVIDADES

11. ACTIVIDAD 1. Buenas practicas de
laboatorio (1 min)
1. Colocarse las
barreras primarias
(Bata blanca
totalmente
abotonada, pelo
largo recogido,
guantes de látex)
2. Desinfectar la mesa
de trabajo con
alcohol etílico 70%.
Barreras primarias y
desinfección

12. Actividad 2. Proteína C Reactiva
Fosfocolina
1) ¿Qué es la Proteína C reactiva?
2) ¿Cómo se produce? ¿A qué alteraciones se asocia?
3) ¿Cuál es su papel en la respuesta inmune?

13. Tipos de pruebas que miden la PCR sistémica
PCR convencional hsPCR
Uso
Evaluación de infección y
alteraciones inflamatorias
agudas
Evaluación de inflamación
en individuos aparentemente
sanos y riesgo cardiovascular
Límite de cuantificación 5 mg/L 1 mg/L
Punto de corte
• Aparentemente sano
• Inflamación moderada
• Inflamación elevada
· < 5 mg/L
· 10 mg/L
· 20 -500 mg/L
· <0.6 mg/L
· 10 mg/L
· >10 mg/L
Método
Aglutinación en látex • lnmunodifusión radial
• ELISA
• Quimioluminiscencia.
• Turbidimetría
• Nefelometría
Medición Semi-cuantitativa Cuantitativa
Muestra
de suero

14. Diluciones seriadas al doble:
(suero con solución salina)
ACTIVIDAD 3. Test de aglutinación en látex
para PCR convencional
1. Correr controles y muestra de acuerdo
a instrucciones del test.
2. Con solución salina (SS) hacer
diluciones seriadas dobles de la
muestra problema: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16;
1:32, 1:64
3. Mezclar 50µl de muestra con 1 gota
de reactivo, hasta la formación de
grumos.
4. Leer en menos de 3 min
5. Será positivo a la máxima dilución en
la que se observe aglutinación
6. Calcular la concentración aproximada
de analito, acuerdo a la fórmula:
PCR (mg/L)= Título sérico x 6 mg/L
Título sérico = Es la inversa de la máxima
dilución.
Sensibilidad del test = 6 mg/L
100 ul
de 1
1
50 ul de 1 +
50 ul de diluy
50 ul de 2 +
50 ul de diluy
50 ul de 3 +
50 ul de diluy
50 ul de 4 +
50 ul de diluy
2 3 4 5
1 1:2 1:4 1:8 1:16
Rvo.
(gota) 1 1 1 1 1

15. Procedimiento de Aglutinación en
Latéx: PCR
3:30
min
https://youtu.be/D-grgg-g4u8

16. Dilución del suero, titulación e
interpretación
6 min
https://youtu.be/-U8W-pUVj80

17. Actividad 4. Procalcitonina
1) ¿Qué es la procalcitonina y la calcitonina?
2) ¿Cuándo se produce procalcitonina y la calcitonina

18. Utilidad e interpretación de Procalcitonina

19. ACTIVIDAD 5. Discusión final
Marcadores de inflamación aguda por bacterias (Sepsis)

20. ACTIVIDAD 6. Buenas prácticas de
laboratorio (4 min)
1. Ordene el material usado
en la práctica.
2. Elimine los objetos o
material potencialmente
peligroso.
3. Desinfecte la mesa de
trabajo con alcohol etílico
70%.
4. Descarte los guantes de
látex.
5. Lavarse las manos.
Desinfección, guantes y
lavado de manos

21. LOGRO
Al finalizar el laboratorio, el estudiante
discute el fundamento y la utilidad de
los marcadores serológicos en el
diagnóstico de inflamación aguda.