Este documento describe la técnica de electroforesis, la cual permite separar mezclas complejas de biomoléculas como ácidos nucleicos, proteínas y otras, basándose en su carga eléctrica, peso molecular y estructura. Explica que las partículas se mueven a través de un gel bajo la influencia de un campo eléctrico, y que su velocidad y dirección de migración depende de estos factores. También resume los diferentes tipos de electroforesis y los reactivos empleados, así como cómo se interpretan

1. ELECTROFORESIS.
INTEGRANTES
NYDIA L. GARCÍA S.

2. FUNDAMENTOS DE LA
TECNICA.
• Alta sensibilidad, resolución y versatilidad.
• Método de separación de
– Ácidos nucleicos, Proteínas, Otras biomoleculas
• Entrega criterio de pureza
• Separa mezclas complejas

3. • Permite determinar
– El peso molecular de una proteína
– Punto isoeléctrico.
– Número de cadenas polipeptídicas de una proteína
• Migración de solutos en un campo eléctrico

4. • • Se mueven las partículas en base a:
– Su carga neta.
– Peso molecular
– Estructura tridimensional

5. • • La Movilidad electroforética (Me)
– Es un caso particular de la migración de un ión.
– En un campo eléctrico de 1V/cm
– Su signo es igual al de la carga de la partícula.
• La velocidad de Migración electroforética
– Carga de la molécula
– Voltaje aplicado
• Exceso de voltaje = Incremento del calor.
• Bajo voltaje = pobre separación(por difusión)
– Porosidad del gel

6. • Las biomacromoléculas.
– Poseen carga eléctrica.
– Grupos catiónicos y aniónicos disociables.
• La carga neta de una molécula
– pH del medio
– La interacción con otras pequeñas moléculas de
iones.

7. CLASES DE ELECTROFORESIS
• Electroforesis en geles de gradientes
• Electroforesis en geles de agarosa
• Electroforesis capilar
• Isoelectroenfoque
• Electroforesis bidimensional
• Electroforesis en gel poliacrilamida

8. TECNICA

9. REACTIVOS USADOS Y SU FINALIDAD
• TAE (Tris+acetico+EDTA): permite mantener las moléculas de DNA
con una carga negativa uniforme y constante.
• Tris:es el agente tamponante que mantiene el pH.

10. • EDTA: secuestro DE Mg++ evita la degradación
del DNA durante la preparación y la electroforesis.
• Azul de bromofenol: marca el "frente de avance".
permite detener la electroforesis con la confianza
de que las moléculas han sido capturadas.

11. • Xileno-cianol: permite detener la electroforesis con
la confianza de que las moléculas grandes de DNA
no se hayan salido del gel.
• Bromuro de etidio: se utiliza para "teñir" el DNA,
para revelar su posición en el gel.

12. INTERPRETACION DE RESULTADOS.
• Las proteínas fijadas en geles de poliacrilamida se
observan como bandas azules de diferentes pesos
moleculares.

13. • puede ser determinado comparando la
banda con un patrón de proteínas estándar
de peso conocido denominado marcador de
peso molecular.
• La distribución de las proteínas depende de
la concentración del gel, por lo tanto, el
operador deberá seleccionar el marcador de
peso molecular más adecuado.
• Algunas proteínas suelen migrar
anómalamente y muchas veces aparecen
con un mayor peso del esperado

14. • Las proteínas degradadas (desnaturalización
de las proteínas por causa de un agente
químico catalizador, ejm: proteasas)

15. GRACIAS.