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Gránulos de Estrés como
reguladores de la transducción de
la señal intracelular del receptor
de IL-1 por el secuestro de
TRAF6, en células HUVEC
TM. Antonio Serrano
Estrés
 Dependiendo de la intensidad
del estrés: los organismos
vivos pueden:
 Apoptosis
 Adaptación
 Mecanismo de defensa
 Reparación del DNA
 Cambios en repertorio proteico
 Represión de Traducción
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 Estructuras citoplasmáticas densas.
Inducido por:
 Shock térmico
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 Radiación UV.
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 HSPs
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traducción abortado
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traduccional
en estrés
Fosforilación de eIF2
PKR es parte del complejo IKK
β
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β
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TRAF2 en SGs
IL-1 R
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Secuestramiento de Factores de
Traducción como eIF4G a los Gránulos de
estrés
Inhibición de la
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estrés interrumpiendo la activación de NF-kB
por la señal del receptor de interleuquina 1, en el
modelo de células endoteliales de cordón
umbilical humano tratadas con arsenita.
 La activación de NF-kB por una señal de
interleuquina 1 se interrumpe en condiciones de
estrés, en el modelo de células HUVEC
Objetivo General
 Determinar la influencia de los gránulos de
estrés en la transducción de señal de un
estimulo proinflamatorio de interleuquina 1
Objetivos Específicos
 1. Estandarización del modelo de inducción de
formación de gránulos de estrés por tratamiento con
arsenita de las células HUVEC
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 Inducción de Gránulos de Estrés con Arsenita
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microscopia confocal.
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 2. Estudiar presencia de TRAF 6 en gránulos de estrés
inducidos con arsenita en células HUVEC y su relación
con proteínas que lo forman como PKR, eIF2a, eIF4,
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 Estandarización de estimulación de HUVEC con IL-1. Western blot para IRAK
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estimuladas con IL-1 recombiante
 Coinmunoprecipitación TRAF6 / PKR, eIF2a, eIF4, TIA-1 y TIAR
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 3. Evaluar nivel de activación de NF-kB en células
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  • 2. Estrés  Dependiendo de la intensidad del estrés: los organismos vivos pueden:  Apoptosis  Adaptación  Mecanismo de defensa  Reparación del DNA  Cambios en repertorio proteico  Represión de Traducción
  • 3. Gránulos de Estrés  Estructuras citoplasmáticas densas. Inducido por:  Shock térmico  Estrés oxidativo.  Radiación UV.  Shock osmótico  Contienen RNA  HSPs  Transitoriamente inactivos  Expresión morfológica de un inicio de traducción abortado
  • 6. PKR es parte del complejo IKK
  • 8.
  • 9.
  • 10.
  • 11.
  • 12. TNFR
  • 15. Hipótesis Señal de Estrés Fosforilación de eIF2α Secuestramiento de Factores de Traducción como eIF4G a los Gránulos de estrés Inhibición de la Traducción Reducción de actividad celular Interleuquina-1 Receptor IL-1 Secuestramiento de TRAF6 Inhibición de señalización NF- κB. Inhibición de respuesta Proinflamatoria
  • 16. Hipótesis  TRAF6 esta secuestrado en los gránulos de estrés interrumpiendo la activación de NF-kB por la señal del receptor de interleuquina 1, en el modelo de células endoteliales de cordón umbilical humano tratadas con arsenita.  La activación de NF-kB por una señal de interleuquina 1 se interrumpe en condiciones de estrés, en el modelo de células HUVEC
  • 17. Objetivo General  Determinar la influencia de los gránulos de estrés en la transducción de señal de un estimulo proinflamatorio de interleuquina 1
  • 18. Objetivos Específicos  1. Estandarización del modelo de inducción de formación de gránulos de estrés por tratamiento con arsenita de las células HUVEC  Establecimiento líneas HUVEC  Inducción de Gránulos de Estrés con Arsenita  Localización intracelular marcadores SGs, TIA-1y eIF2α con microscopia confocal.
  • 19. Objetivos Específicos  2. Estudiar presencia de TRAF 6 en gránulos de estrés inducidos con arsenita en células HUVEC y su relación con proteínas que lo forman como PKR, eIF2a, eIF4, TIA-1 TIAR, bajo la señal de IL-1R  Estandarización de estimulación de HUVEC con IL-1. Western blot para IRAK activo  Microscopía confocal y colocalización de TRAF6 en SGs de células HUVEC estimuladas con IL-1 recombiante  Coinmunoprecipitación TRAF6 / PKR, eIF2a, eIF4, TIA-1 y TIAR
  • 20. Objetivos Específicos  3. Evaluar nivel de activación de NF-kB en células HUVEC estimuladas con IL-1 sometidas a estrés con arsenita.  EMSA para evidenciar activación de NF-κB