Este documento presenta los protocolos y objetivos de un laboratorio para el análisis de manchas de sangre y semen. Incluye las reacciones de orientación y certeza para identificar manchas de sangre, así como técnicas para determinar el grupo sanguíneo y examinar muestras al microscopio. También cubre los procedimientos y reactivos para identificar manchas de semen, incluyendo reacciones químicas y el análisis de fosfatasa ácida y espermatozoides.

1. Universidad de El Salvador
Facultad de Química y Farmacia
Departamento de análisis químico e instrumental
Química legal y análisis toxicológico .
CICLO 1 - 2012
PRELABORATORIO DE
PRACTICA #2
ANÁLISIS DE MANCHAS DE
SANGRE, SEMEN
Licdo. Juan Agustín Cuadra Soto

2. REGLAMENTO DE HIGIENE Y SEGURIDAD PARA
LOS LABORATORIOS DE LA FACULTAD DE
QUÍMICA Y FARMACIA DE LA UNIVERSIDAD DE
EL SALVADOR
• INDISPENSABLE «CAMARA DE GASES».
• NO SE COMENZARA NINGUNA ACTIVIDAD SIN LA
PRESENCIA DEL DOCENTE RESPONSABLE.
• INDUMENTARIA BASICA INDISPENSABLE.
• PROHIBIDO EL USO DE CUALQUIER
INSTRUMENTO ELECTRONICO DE MUSICA O
CELULARES QUE PUEDAN GENERAR
DISTRACCION.
• COLOCAR LOS DESECHOS EN LOS
CONTENEDORES CORRESPONDIENTES A LA
NATURALEZA DEL TOXICO.
• TODO ESTUDIANTE QUE IRRESPETE EL
REGLAMENTO SE SOMETERA A UNA SANCION LA
CUAL ESTA ESPECIFICADA EN EL REGLAMENTO
GENERAL.

3. REGLAMENTO INTERNO DE HIGIENE Y SEGURIDAD
PARA EL LABORATORIO DE QUIMICA LEGAL Y
ANALISIS TOXICOLOGICO (REVISION 2010)
• INDISPENSABLE «CAMARA DE GASES».
• NO SE COMENZARA NINGUNA ACTIVIDAD SIN LA
PRESENCIA DEL DOCENTE RESPONSABLE.
• INDUMENTARIA BASICA INDISPENSABLE.
• PROHIBIDO EL USO DE CUALQUIER
INSTRUMENTO ELECTRONICO DE MUSICA O
CELULARES QUE PUEDAN GENERAR
DISTRACCION.
• COLOCAR LOS DESECHOS EN LOS
CONTENEDORES CORRESPONDIENTES A LA
NATURALEZA DEL TOXICO.
• TODO ESTUDIANTE QUE IRRESPETE EL
REGLAMENTO SE SOMETERA A UNA SANCION LA
CUAL ESTA ESPECIFICADA EN EL REGLAMENTO
GENERAL.

4. OBJETIVOS:
Explicar las reacciones de orientación para
la identificación de manchas tanto de sangre
como de semen.
Explicar las reacciones de certeza en la
identificación de manchas de tanto de
sangre como de semen.
Indicar como se puede reconocer si la
mancha de sangre encontrada es de origen
humano.
Utilizar adecuadamente los reactivos
correspondientes para identificar las
manchas de sangre.
Determinar el grupo sanguíneo.
Aplicar los reactivos adecuados para la
investigación de manchas de semen.
Reconocer un espermatozoide e identificar
correctamente las partes que los forman.

5. REACTIVOS MATERIAL Y EQUIPO
• Reactivo de Meyer • Porta objetos, cubreobjetos.
• Reactivo de Medinger • Agitador
• Reactivo de Nippe • Tubos de ensayo
• Reactivo de Gabriel • Frasco lavador
Bertrand
• Caja de Petri
• Solución salina
(capsula de porcelana; vidrio de
• Reactivo antisuero: reloj)
Seraciones Anti A, B, AB
• Mechero
• Almacenar: 28°C
• Papel indicador
• Reactivo de Florence.
• Papel filtro
• Metanol al 80°
• Gotero
• Solución de Eritrosina 0.5%
• Microscopio
en amoniaco
• Incubadora
• Solución de azul de
metileno al 0.05% • Pinza de sostén
• Metanol Absoluto. • Bandeja de Tinción
• Etanol • Refrigeradora
• Amoniaco.

6. Previamente al
análisis revisar y
anotar las
condiciones en
que se recibe la
muestra, extraerl
a sin romper el
sello de la
institución que lo
remite.

7. DETERMINACION
DE MANCHAS DE
SANGRE
REACCIONES DE
ORIENTACION

8. Preparar la muestra con agua destilada lo mas
concentrada posible «solución muestra»
La preparación de la muestra en el Laboratorio se realiza
de la siguiente manera:

9. REACCION DE MEYER
(KASTLE-MEYER)
1 mL de Agregar 3
solución de gotas de
Mancha amoniaco, par
a alcalinizar.
Utilizar papel
pH.
Agregar 1
mL de
reactivo
Agregar 3 gotas
de agua
oxigenada de 10
volúmenes
La formación de una coloración
roja.
«posible presencia de sangre»

10. REACCION DE MEDINGER
(PIERRE MEDINGER)
Tomar una Impresión
de la mancha con
papel filtro húmedo.
«llevar un
testigo, con agua
destilada»
Extender el papel (mx y
testigo) sobre una
capsula de porcelana.
Previamente rutorulada
10 mL de Reactivo + 16 gotas
de H2O2 10 vol. Dividirlo en dos.
(5 mL en capsula de porcelana).

11. REACCIÓN DE
QUIMIOLUMINISCENCIA
(PRUEBA DE LUMINOL)
Buscar residuos de sangre
en el lugar y delimitar el
área.
Preparar el reactivo de
luminol (5 mL H2O + 5 mL
H2O2 10 vol. + 5 mL de
Buffer) y colocarlo en un
esprayador.
Rociar el reactivo en la
zona; observar en cámara
de luz UV.
La prueba se debe de realizar en un zona oscura
para observar la luminiscencia.

12. EN EL LABORATORIO SE
REALIZARA LA PRUEBA DE
LUMINOL EN UNA CÁMARA
UV

13. DETERMINACION
DE MANCHAS DE
SANGRE
REACCIONES DE
CERTEZA

14. FORMACION DE CRISTALES DE
HALUROS DE HEMINA (NIPPE)
Colocar una gota de la solución
muestra y colocarla sobre un
porta objeto.
Fijar la muestra con ayuda de
un mechero.
«Controlar que la Temp. no sea
mayor que la que pueda
soportar el dorso»
Agregar unas gotas de
reactivo de Nippe sobre la
película obtenida. Colocar
un cubre objeto y calentar
hasta comienzo de
ebullición
Agregar 1 mL de reactivo de
Nippe en la orilla del
cubreobjetos y efectuar la
observación al microscopio.

15. REACTIVO DE GABRIEL
BERTRAND
1 gota de la solución
muestra se coloca
en un portaobjeto
con la ayuda de u
mechero aplicar
calor leve hasta la
formación de una
película.
Agregar 1 gota de
reactivo y calentar
hasta ebullición y
retire.
Colocar una gota de
reactivo en la orilla del
cubreobjetos y
observar en el
microscopio.

16. PRUEBA DE TIPEO
SANGUÍNEO POR
AGLUTINACIÓN
Depositar 1 gota
de hematíes
problema; con un
POSIBILIDAD DE REACCION
hematocrito 35-
40% sobre una
ANTI-A ANTI-B ANTI-AB GRUPO
placa. SANGUINEO
A REPORTAR
+ - + Añadir una gota
A
(aproximadamente
- + + 50 microlitros de
B
reactivo.
- - - O
Mezclar bien la sangre
+ + + AB
con el reactivo formando
un circulo de unos 2 cm
de diámetro, mover la
placa lentamente con
movimientos basculares
durante 2 minutos.

17. IDENTIFICACIÓN
DE MANCHAS
DE SEMEN
PREPARACION DE LA MUESTRA
Si la muestra no es reciente,

18. REACCIÓN DE
BARBERIO
Se coloca una gota
de la maceración
de la mancha sobre
un portaobjetos .
Preparar un
blanco
Se añade una gota
de reactivo y se
cubre con un
cubreobjetos.
Observar al
microscopio

19. REACCIÓN DE
FLORENCE
PREPARACION DE LA MUESTRA Y TECNICA
Cortar un trozo de tela
con mancha de semen y
machacarlo en un
tubo, agregarle unas
gotas de agua. Dejarlo en
20 min.
Colocar 1 gota en un
portaobjeto, secar en
estufa a 37ºC, dejar que
se enfríe.
Colocar un cubreobjetos
(laminilla) sobre la
mancha.
Con un gotero agregar el
reactivo de Florence

20. ANÁLISIS DE FLUIDO SEMINAL
“FOSFATASA ACIDA”
• Esta prueba se fundamenta en la detección de la enzima
fosfatasa acida. “no es especifica para el fluido seminal”
Cortar una mínima
Colocar un control
porción de la materia
positivo y otro
hisopo y colocarla en
negativo.
un soporte limpio.
Agregue una o dos
gotas de reactivo I a Dejar reposar por 5
cada muestra y a los minutos
controles.
Agregar una o dos La presencia de un
gotas de reactivo II a color azul brillante se
cada muestra y los interpreta como
controles positivo.

21. EXAMEN
MICROSCÓPICO
REACTIVOS:
• ALCOHOL METILICO AL 80%
• SOLUCION DE ERITROSINA AL 0,5% EN AMONIACO
• SOLUCION AZUL DE METILENO AL 0.05%
• ALCOHOL METILICO ABSOLUTO.
El frotis evaporado a
sequedad a Ta. Ambiente, se
fija con 3-5 gotas de alcohol
metílico al 80%, por la
orilla, inclinado el porta-
objeto, se seca con ayuda
del calor
Se pone el reactivo de
Eritrosina durante 3
minutos, se retira el
colorante y se lava
ligeramente por el borde con
agua destilada, usando el
frasco lavador.

22. EXAMEN
MICROSCÓPICO
Colocar una gota
de reactivo de
azul de metileno
durante 1 minuto.
Se retira el
colorante, lavand
o ligeramente con
agua destilada.
Se deshidrata
con 5 gotas de
alcohol metílico
absoluto.
Se observa en el
microscopio, donde
aparecen los
espermatozoides

23. MUCHAS GRACIAS
POR SU ATENCION
“El trabajo que nunca
se empieza es el que
tarda más en
finalizarse.”
PREGUNTAS…..?
Sugerencias y comentarios