Tesis de grado !!!!

1. Obtención de aislamientos de
Pythium spp. de soja (Glycine max
L.) de suelos de Balcarce y prueba
de sensibilidad a fungicidas.
Tesis de Grado para optar al título de
Ingeniero Agrónomo
Alumno: Sergio Maximiliano Pase
Director: Ing. Agr. M.Sc. Pablo Enrique Grijalba
Codirector: Ing. Agr. Esp. Hemilse Elena
Palmucci

2. 2001-2005
1981-1985
1991-1995
1971-1975
2005-2010
Fuente: www.laargentinaenmapas.com.ar (CONICET)

3. Objetivo del Proyecto: obtener
aislamientos de Pythium spp. de la
localidad de Balcarce, provincia de Buenos
Aires y probar su patogenicidad y
sensibilidad frente a fungicidas.

4. Pythium spp. :
Psudohongo: Paredes compuestas de celulosa y sin quitina.
Micelio: Hifas cenocíticas (plurinucleado)
Reproducción asexual: Zoospora, flagela por división citoplasmática.
Reproducción sexual: Oospora formada por contacto gametangial entre
anteridio y oogonio.
Habitante del suelo.
Las mejores condiciones para su desarrollo son los altos niveles de
humedad y las temperaturas de 20- 25°C.
Signos y Sintomatología: Lesión castaño oscura o negro, crecimiento
reducido de la planta, crecimiento miceliar blanco algodonoso en el
cuello. Damping-off
Clasificación taxonómica:
Reino: Chromista- Stramenopila
División: Oomycetes
Orden: Peronosporales
Familia: Pythiaceae
Genero: Pythium
Especie: spp.

5. Obtención de aislamientos de Pythium:
Trampa con semillas de soja” o “Baiting Technique”
Siembra 20 semillas.
En estado cotiledonar VC anegamiento durante 8 Hs
Se retiró el agua, se esperó entre 3 a 4 días para
observar plántulas anormales Se cortaron secciones
del tejido infectado.
Siembra debajo de un medio selectivo para Oomycotas.
(APD) + Antibióticos + Fungicidas
Dentro de las 24 a 48 horas desde la siembra, se repicaron
las puntas del micelio (APD),
Los cultivos puros se procedió a cultivarlos en tubos pico de
flauta y/o Eppendorf.

6. Resultados Obtención de aislamientos de Pythium:
A través de la “Baiting Technique” se obtuvieron gran cantidad de plántulas que presentaban
crecimiento anormal, puntas de raíces negras , y podredumbres a la altura del cuello de la
plántula. De estas se aislaron :
18 Suelo I
10 Suelo III
18 Suelo IV
Total 46
Aislamientos Puros

7. Selección de aislamientos para ensayos.
Se seleccionaron 15 aislamientos con características típicas de Pythium de cada una
de las muestras de suelo.
Micelio filamentoso cenocítico (plurinucleado)
 Presencia de esporangios lobulados y esféricos
 Zoosporas biflageladas y reniformes
Formación de oogonios esféricos o subesféricos, terminales o intercalares.
Las oosporas son esféricas, de membrana lisa o reticulada.
•Trocito/s de APG con
desarrollo miceliar.
•Agua estéril y segmentos
de 1-2 cm de césped
Agrostis sp.

8. Ensayos:

9. Ensayo de patogenicidad in vitro y
calculo de PG:
 Se repicaron cultivos puros, de los 15 aislamientos seleccionados en cajas de Petri.
 Se colocaron en cada caja 10 semillas previamente desinfectadas.
 4 repeticiones por cada uno de los aislamientos.
•Semillas y/o plántulas Muertas
Se cuantifico: •Plántulas infectadas
•Plántulas normales
PG = 97%

10. •Los aislamientos obtenidos de la muestra de
suelo I fueron los que presentaron mayor
variabilidad en su patogenicidad, el
aislamiento presento un 56.75 % de
patogenicidad, mientras que el un 82.25
Aislamiento Variable n Media Des. Est.
%
I 12 % Mortandad 4 82.25 3.69 •Los aislamientos pertenecientes a la muestra
I 13 % Mortandad 4 80.00 2.31 de suelo III fueron los más patógenos, con un
I2 % Mortandad 4 81.25 4.27 82,8% de patogenicidad promedio, de los
cuales el aislamiento resultó ser el más
I 20 % Mortandad 4 56.75 2.50
patógeno con un valor de 85,75 % de
I 22 % Mortandad 4 81.25 4.27 mortandad.
III 2 % Mortandad 4 84.50 2.89 •Los aislamientos pertenecientes a la muestra
III 3 % Mortandad 4 83.50 4.36 de suelo IV fueron los que presentaron
III 4 % Mortandad 4 85.75 2.50 menor % de patogenicidad con un valor
promedio de 62,80% y a su vez evidenciaron
III 7 % Mortandad 4 75.25 4.50
una mayor heterogeneidad en sus valores,
III 9 % Mortandad 4 83.50 4.36 Desvió estándar: 3,19
IV 17 % Mortandad 4 63.00 10.80
Suelo Variable n Media Des. Est.
IV 18 % Mortandad 4 66.75 4.79
I % Mortandad 5 76.2 10.76
IV 19 % Mortandad 4 58.00 4.08
IV 21 % Mortandad 4 62.75 13.67 III % Mortandad 5 82.8 4.44
IV 9 % Mortandad 4 63.00 4.08 IV % Mortandad 5 62.8 3.19

11. Sensibilidad in vitro frente a fungicidas
Los fungicidas a utilizados:
Metalaxil con una dosis de 10 ppm (CASAFE 2007)
Carbendazim+Tiram con una dosis de 100 ppm (Dorrance et al., 2004)
Los tratamientos han sido 3, los dos principios activos y el testigo correspondiente. Se
efectuaron 4 repeticiones para cada tratamiento.
En aquellos aislamientos que evidenciaban un mínimo crecimiento sobre el medio con
fungicida, se procedió a medir la tasa de crecimiento diaria en medio de cultivo con y sin
fungicida.

12. Methalaxyl Carbendazim + Thiram Methalaxyl Carbendazim + Thiram
Aislamiento Aislamiento Dosis 10 ppm Dosis 100 ppm
Dosis 10 ppm Dosis 100 ppm
I2 Con inhibición Sin inhibición I2 Con inhibición Sin inhibición
I12 Con inhibición Sin inhibición I12 Con inhibición Sin inhibición
I13 Con inhibición Sin inhibición I13 Con inhibición Sin inhibición
I20 Sin inhibición Sin inhibición I20 Con inhibición Sin inhibición
I22 Con inhibición Sin inhibición I22 Con inhibición Sin inhibición
III4 Con inhibición Sin inhibición III4 Con inhibición Sin inhibición
III2 Con inhibición Con inhibición III2 Con inhibición Con inhibición
III3 Con inhibición Sin inhibición III3 Con inhibición Sin inhibición
III7 Con inhibición Sin inhibición III7 Con inhibición Sin inhibición
III9 Con inhibición Sin inhibición III9 Con inhibición Sin inhibición
IV17 Con inhibición Sin inhibición IV17 Con inhibición Sin inhibición
IV9 Con inhibición Sin inhibición IV9 Con inhibición Sin inhibición
IV18 Con inhibición Sin inhibición IV18 Con inhibición Sin inhibición
IV19 Con inhibición Con inhibición IV19 Con inhibición Con inhibición
IV21 Con inhibición Con inhibición IV21 Con inhibición Con inhibición
% de Inhibición 93 % 20% % de Inhibición 100 % 20%
Con la dosis de 10presento Metalaxil in vitro la inhibición fue del 100% de los aislamientos lo
Metalaxil ppm. de un 93% de inhibición ya que 1 solo aislamiento presentó
que demuestra una altaun total dede control porque el de dicho principio activo sobre los
crecimiento de eficiencia 15. Mientras parte Carbendazim + Thiram
aislamientos del género% de inhibición debido a que únicamente 3 aislamientos no 100 ppm.
presentó un 20 Pythium. Cuando el medio de cultivo contenía una dosis de
de Carbendazim+Tiram inhibió al 20% de los aislamientos, por ende la eficiencia de control
presentaron desarrollo.
resultó ser muy baja

13. Sensibilidad in vivo frente a fungicidas
 Metalaxil con una dosis de 50 cm3 / 100 Kg. de semilla. (MET)
 Carbendazim+Tiram con una dosis de 200 cm3 / 100 Kg. de semilla (RIT)
Semilla sin tratar y sin inóculo.
Tratamientos: Semilla sin tratar y con inóculo.
Semilla tratada con fungicida y sin inóculo.
Semilla tratada con fungicida y con inóculo.
Variable medida: N° de Plántulas emergidas sanas.
Semilla Soja
Tierra Tindalizada Mezcla de tierra y
arena
Arena esterilizada APD con micelio

14. Metalaxil controló de manera
eficiente los 15 aislamientos
en forma conjunta.
Alta eficiencia de este
principio activo sobre el
Testigo Testigo Metalaxil Inoculado Metalaxil Testigo Inoculado
género Pythium.
Test:LSD Fisher Alfa=0,05 DMS=2,65474
Cuadro de Análisis de la Varianza (SC tipo III) Error: 3,2500 gl: 14
F.V. SC gl CM F p-valor Tratamiento Medias n E.E.
Modelo. 256,50 3 85,50 26,31 <0,0001 Testigo 1,50 6 0,74 A
Tratamiento 256,50 3 85,50 26,31 <0,0001 Inoculado MET 1,67 3 1,04 A
Error 45,50 14 3,25 Testigo MET 2,00 3 1,04 A
Total 302,00 17 Inoculado 9,67 6 0,74 B
Para la mezcla de fungicidas
Carbendazim+Tiram los datos
evidenciaron que el tratamiento no
generó ningún tipo de protección.
Baja eficiencia de control sobre el
Testigo Carbendazim Inoculado Carbendazim Testigo Inoculado
género Pythium.
Testigo
Test:LSD Fisher Alfa=0,05 DMS=2,65474
Cuadro de Análisis de la Varianza (SC tipo III)
Error: 3,2500 gl: 14
F.V. SC gl CM F p-valor
Tratamiento Medias n E.E.
Modelo. 290,50 3 96,83 29,79 <0,0001
Testigo RIT 1,00 3 1,04 A
Tratamiento 290,50 3 96,83 29,79 <0,0001
Testigo 1,50 6 0,74 A
Error 45,50 14 3,25
Inoculado RIT 8,67 3 1,04 B
Total 336,00 17
Inoculado 9,67 6 0,74 B

15. Conclusiones:
• De los suelos muestreados se aislaron 46 cepas
de Pythium, de las cuales, las 15 seleccionadas
presentaron distinto grado de patogenicidad.
• No se encontraron aislamientos resistentes a
Metalaxil, siendo muy eficiente su control tanto
in vitro como in vivo, con un 100% de eficiencia.
• El Carbendazim+Tiram presentó valores bajos de
eficiencia, siendo del 20% in vitro y 5% in vivo.