Tesilla Curso Transducción de Señales 2006. Doctorado en Bioquímica

1. Gránulos de Estrés como
reguladores de la transducción de
la señal intracelular del receptor
de IL-1 por el secuestro de
TRAF6, en células HUVEC
TM. Antonio Serrano

2. Estrés
 Dependiendo de la intensidad
del estrés: los organismos
vivos pueden:
 Apoptosis
 Adaptación
 Mecanismo de defensa
 Reparación del DNA
 Cambios en repertorio proteico
 Represión de Traducción

3. Gránulos de Estrés
 Estructuras citoplasmáticas densas.
Inducido por:
 Shock térmico
 Estrés oxidativo.
 Radiación UV.
 Shock osmótico
 Contienen RNA
 HSPs
 Transitoriamente inactivos
 Expresión morfológica de un inicio de
traducción abortado

4. Incicio
traduccional
en estrés

5. Fosforilación de eIF2

6. PKR es parte del complejo IKK

7. β
αγ PKR
β
αγ
eIF2B
P65
Iκβ
P50
eIF2

12. TNFR

13. TRAF2 en SGs

14. IL-1 R

15. Hipótesis
Señal de Estrés
Fosforilación de eIF2α
Secuestramiento de Factores de
Traducción como eIF4G a los Gránulos de
estrés
Inhibición de la
Traducción
Reducción de actividad celular
Interleuquina-1
Receptor IL-1
Secuestramiento de TRAF6
Inhibición de señalización NF-
κB.
Inhibición de respuesta Proinflamatoria

16. Hipótesis
 TRAF6 esta secuestrado en los gránulos de
estrés interrumpiendo la activación de NF-kB
por la señal del receptor de interleuquina 1, en el
modelo de células endoteliales de cordón
umbilical humano tratadas con arsenita.
 La activación de NF-kB por una señal de
interleuquina 1 se interrumpe en condiciones de
estrés, en el modelo de células HUVEC

17. Objetivo General
 Determinar la influencia de los gránulos de
estrés en la transducción de señal de un
estimulo proinflamatorio de interleuquina 1

18. Objetivos Específicos
 1. Estandarización del modelo de inducción de
formación de gránulos de estrés por tratamiento con
arsenita de las células HUVEC
 Establecimiento líneas HUVEC
 Inducción de Gránulos de Estrés con Arsenita
 Localización intracelular marcadores SGs, TIA-1y eIF2α con
microscopia confocal.

19. Objetivos Específicos
 2. Estudiar presencia de TRAF 6 en gránulos de estrés
inducidos con arsenita en células HUVEC y su relación
con proteínas que lo forman como PKR, eIF2a, eIF4,
TIA-1 TIAR, bajo la señal de IL-1R
 Estandarización de estimulación de HUVEC con IL-1. Western blot para IRAK
activo
 Microscopía confocal y colocalización de TRAF6 en SGs de células HUVEC
estimuladas con IL-1 recombiante
 Coinmunoprecipitación TRAF6 / PKR, eIF2a, eIF4, TIA-1 y TIAR

20. Objetivos Específicos
 3. Evaluar nivel de activación de NF-kB en células
HUVEC estimuladas con IL-1 sometidas a estrés con
arsenita.
 EMSA para evidenciar activación de NF-κB

21. Resultados esperados
IL-1
TRAF6
TRAF6