Estudio clínico sobre un nuevo marcador tumoral para detección de hepatocarcinoma. Ventajas sobre la Alfa-fetoproteína.

1. NUEVO
MARCADOR
TUMORAL:
Zappa Santiago Andres.Zappa Santiago Andres.
Practicanato Profesional, Bioquímica.Practicanato Profesional, Bioquímica.
CLUSTERINCLUSTERIN

2. Importancia clínica de la determinación de Clusterin sérica como un biomarcador paraImportancia clínica de la determinación de Clusterin sérica como un biomarcador para
evaluar el diagnóstico y potencial metástasis de hepatocarcinoma relacionados a virusevaluar el diagnóstico y potencial metástasis de hepatocarcinoma relacionados a virus

3. ¿Qué es Clusterin?¿Qué es Clusterin?
Glicoproteína multifuncional altamente conservadaGlicoproteína multifuncional altamente conservada
presente en todos los tejidos y fluidos corporalespresente en todos los tejidos y fluidos corporales
TRANSPORTE
DE LIPIDOS
REGULACIÓN DEL
COMPLEMENTO
RESPUESTA
AL ESTRES
REMODELADO
TISULAR
APOPTOSIS
INTERACCIÓN
CELULAR
TUMORIGENESIS
PROLIFERACIÓN
CELULAR

4. CLUSTERINCLUSTERIN
• Gen de copia única
• Localizado en el Cromosoma 8 (p21-p12)
• Expresión altamente regulada
• Causa agregación (clustering) de Globulos Rojos In Vitro
• Anti-apoptotica y anti-proliferativa
• Diversas isoformas con funciones opuestas
Schematic representation of the structure of human clusterin.
The precursor polypeptide chain (top) is cleaved proteolytically to
remove the 22-mer secretory signal peptide (magenta) and subsequently
between residues 227/228 to generate the (orange)- and (light blue)-
chains. These are assembled in anti-parallel to give a heterodimeric
molecule (bottom) in which the cysteine-rich centers (red) are linked by
five disulfide bridges (red ellipses) and are flanked by two predicted
coiled-coil -helices (green) and three predicted amphipathic-helices (dark
blue). The six sites of N-linked glycosylation are indicated as yellow spots.

5. El rol de Clusterin en el cáncer
• Aún no se conoce completamente su
acción fisiopatológica
Niveles aumentadosNiveles aumentados
•Cáncer de pulmón
•Cáncer de colon
•Cáncer de mama
•Cáncer de vejiga
•Cáncer de hígado
Niveles disminuídosNiveles disminuídos
•Cáncer de piel (no-melanoma)
•Cáncer de esófago
•Cáncer de prostata

6. HEPATOCARCINOMAHEPATOCARCINOMA
• Sexto tipo de cáncer más común a nivel Mundial
• Incidencia mundial: 5.9%
• Mortalidad mundial: 9.2%.
• Incidencia en Argentina: 1.8%
• Mortalidad en Argentina: 3.0%
• Mayor prevalencia en adultos mayores de 40 años
• Principales causas:
• Hepatitis B
• Hepatitis C
• Alcoholismo
90% de los casos
(Globocan, 2008)

7. HEPATOCARCINOMAHEPATOCARCINOMA
• Generalmente asintomático en los estadíos iniciales.
• A medida que el tumor va creciendo:
• Fiebre
• Pérdida progresiva de peso
• Pérdida del apetito
• Debilidad y cansancio
• Dificultades con la digestión, vómitos.
• En pacientes con Cirrosis - La descompensación o el
deterioro clínico pueden ser la forma de manifestar un
HCC:
• Encefalopatía
• Ascitis
• Ictericia
• Hemorragia digestiva

8. S C R E E N I N GS C R E E N I N G
Ecografía
+
Serología alfa-fetoproteína
D I A G N Ó S T I C OD I A G N Ó S T I C O
Radiología
Tomografía computarizada
Imágenes (resonancia magnética)
Biopsia
Serología alfa-fetoproteína

9. Clusterin como biomarcadorClusterin como biomarcador
• Grupo 1Grupo 1  Hepatocarcinoma (n=80)
• Estadío I (n=40)
• Estadío II (n=10)
• Estadío III (n=18)
• Estadío IV (n=12)
• Grupo 2Grupo 2  Cirrosis de origen viral (n=30)
• Grupo 3Grupo 3  Hepatitis crónica viral (n=30)
• Grupo 4Grupo 4  Control (n=30)
Sistema TNM
Según American Joint Committee on Cancer

10. Muestra: sueroMuestra: suero
Determinaciones:
TGP
TGO
Albúmina
FAL
Bilirrubina
Creatinina
Alfa-fetoproteína
HBsAg
Anti-HCV
MétodosMétodos
enzimáticos deenzimáticos de
rutinarutina
ELISAELISA

11. Determinación de la concentraciónDeterminación de la concentración
de Clusterinde Clusterin
ELISA SandwichELISA Sandwich SUSTRATO
PRODUCTO
Estreptavidina unida a peroxidasa
Ac. Monoclonal anti-clusterin biotinilado
CLUSTERIN
Ac. Monoclonal anti-clusterin

12. RESULTADOSRESULTADOS
ParámetrosParámetros ControlControl
HepatitisHepatitis
CrónicaCrónica
CirrosisCirrosis HCCHCC
HCVHCV - 27 (90%) 25 (83%) 64 (80%)
HBVHBV - 2 (7%) 3 (10%) 12 (15%)
HCV+HBVHCV+HBV - 1 (3%) 2 (7%) 4 (5%)
TGOTGO (U/L) 24.9 ± 6.6 75.2 ± 24.5 69.2 ± 19.5 73.2 ± 23.5
TGPTGP (U/L) 26.4 ± 7.8 70.5 ± 22.5 68.6 ± 17.5 71.1 ± 21.5
FALFAL (U/L) 45.1 ± 8.1 73.1 ± 11.3 133.2 ± 34.2 300.3 ± 20.3
AlbúminaAlbúmina (g/L) 4.5 ± 1.1 4.1 ± 1.4 3.4 ± 1.3 3.5 ± 1.1
BilirrubinaBilirrubina (mg/dL) 1.0 ± 0.3 1.2 ± 0.4 1.9 ± 0.5 2.5 ± 0.8
CreatininaCreatinina (mg/dL) 0.80 ± 0.20 0.90 ± 0.27 1.00 ± 0.45 1.10 ± 0.34

13. Clusterin vs.Clusterin vs. α-FPNα-FPN
GRUPOGRUPO
Clusterin sérica
(µg/mL)
Media ± DS
α-FPN sérica
(ng/mL)
Media (rango)
HCCHCC 198.5 ± 55.8 209 (10-570)
CIRROSISCIRROSIS 44.5 ± 7.1 35 (4-210)
H. CRÓNICAH. CRÓNICA 117.0 ± 18.8 10 (1.7-135.1)
CONTROLCONTROL 109.0 ± 18.3 2.3 (1.5-5.1)
(p<0.001) (p<0.001)

14. (0 ug/mL) (280 ug/mL)
CIRROSIS
NORMAL
H. CRÓNICA HCC
CLUSTERINCLUSTERIN
(0 ng/mL) (200 ng/mL)
NORMAL
H. CRÓNICA
CIRROSIS
HCC
α-FPNα-FPN

15. SensibilidadSensibilidad
ClínicaClínica
EspecificidadEspecificidad
ClínicaClínica
VPPVPP VPNVPN
ClusterinClusterin
(128(128 µg/mLµg/mL))
90% 87% 87.8% 89.7%
α-FPNα-FPN
(100 ng/mL)(100 ng/mL)
75% 80% 76.9% 78.2%
 En ArgentinaEn Argentina Prevalencia = 0.8%Prevalencia = 0.8%
VPP (Bayes)VPP (Bayes) =
Prev x Sc
(Prev x Sc) + (1 – Prev) x (1 – Ec)
VPP = 5%
(α-FPN = 3%)
VPN (Bayes)VPN (Bayes) =
(1 – Prev) x Ec
(1 – Prev x Ec) + Prev x (1 – Sc)
VPN = 87%
(α-FPN 79%)

16. Parámetros ClusterinClusterin α-FPNα-FPN
A mayor tamaño del nódulo No varía ↑↑
A mayor Nº de nódulos No varía ↑↑
Con infiltración capsular ↑↑ No varía
Con invasión de la vena portal ↑↑ No varía
Con metástasis en ganglios
linfáticos
↑↑ No varía
A mayor grado de indiferenciación ↑↑ No varía
Clusterin vs.Clusterin vs. α-FPNα-FPN

17. CONCLUSIONESCONCLUSIONES
• Los niveles séricos de Clusterin están
significativamente elevados en pacientes
con Hepatocarcinoma
• Los niveles de Clusterin están
significativamente disminuídos en
pacientes con Cirrosis
Permitiría diferenciar entre Cirrosis y Hepatocarcinoma

18. CONCLUSIONESCONCLUSIONES
• Los niveles de Clusterin no varían con el
Número de nódulos ni con el tamaño de
los nódulos
Serviría para detectar nódulos muy
pequeños en donde la α-FPN no estaría
significativamente aumentada
permite distinguir de una cirrosis

19. CONCLUSIONESCONCLUSIONES
• Clusterin tiene un VPN elevado
Podría ser utilizada como una determinación para el
screening de HCC, especialmente en pacientes con
Cirrosis
• Clusterin sería un mejor Marcador
tumoral que la α-Fetoproteína
PUEDO
USAR UN
MÉTODO
MENOS SENSIBLE
CON MAYOR LÍMITE
DE DETECCIÓN

20. CONCLUSIONESCONCLUSIONES
• Clusterin está sobreexpresada en
pacientes con infiltración capsular,
invasión de la vena portal, infiltración de
ganglios y tumores más indiferenciados
Elevado valor
PRONOSTICOPRONOSTICO
Sería un mejor marcador para el seguimiento
Permitiría saber en qué estadío de la patología se
encuentra el paciente

21. Pacientes con cirrosis hepática
serían la población ideal para la
vigilancia-screening de HCC
Al poder diferenciardiferenciar entre
Hepatocarcinoma y cirrosis hepática,
la probabilidad de supervivenciasupervivencia de
los pacientes con HCC aumentaría
significativamente

22. BibliografíaBibliografía
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diagnosis and metastasis potential of viral-related hepatocelular carcinoma. Clinical Biochimestry 45
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hepatocellular carcinoma with hepatitis B virus related cirrhosis. J Gastroenterol Hepatol 2010:1123–8.
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Pathol 2004;35:1340–6.
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21.
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• Sellés Juana. Marcadores tumorales. Cátedra de Bioquímica Clínica II, Universidad Nacional del Sur, Argentina.
• Fundación Argentina Cáncer de Hígado. http://cancerdehigado.org.ar/index.html
• American Association for the study of Liver diseases practice guideline. Management of hepatocellular
carcinoma: an update. 2012.
• GLOBOCAN 2008. Agencia internacional para la investigación del cáncer. OMS.

23. M U C H A SM U C H A S
G R A C I A S ! !G R A C I A S ! !
!!