1.
TINCIÓN DE GRAM
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DEFINICIÓN
PASOS
FUNDAMENTO
TÉCNICA

2.
TINCIÓN DE GRAM: DEFINICIÓN
La tinción de Gram es una tinción diferencial
muy utilizada en Bacteriología para observar
bacterias en muestras clínicas.
Debe su nombre a Christian Gram (1984)
 Morfología bacteriana
 Diferenciación bacteriana
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3.
TINCIÓN DE GRAM: FUNDAMENTO
El fundamento de la tinción de Gram se basa en
las diferencias de la pared celular de las
bacterias Grampositivas y Gramnegativas.
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4.
TINCIÓN DE GRAM: FUNDAMENTO
La pared celular de las Bacterias Gram positivas
posee una gruesa capa de peptidoglicano
(retiene el complejo colorante-mordiente)y dos
clases de ácido teicoico
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5.
TINCIÓN DE GRAM: FUNDAMENTO
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6.
TINCIÓN DE GRAM: FUNDAMENTO
La pared celular de las bacterias Gram negativas
tiene una capa de peptidoglucano más fina
(facilita la salida del complejo colorante-mordiente)
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7.
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TINCIÓN DE GRAM: PASOS
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8.
El cristal violeta penetra en todas las células
bacterianas a través de la pared bacteriana
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TINCIÓN DE GRAM: PASOS
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9.
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TINCIÓN DE GRAM: PASOS
El lugol actúa como mordiente haciendo que el
cristal violeta se fije con mayor intensidad a la
pared de la célula bacteriana.
El I2 entra en las células y forma un complejo
insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.
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10.
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TINCIÓN DE GRAM: PASOS
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega,
sirve para realizar la decoloración, ya que en la
misma es soluble el complejo I2-cristal violeta.
Los organismos Gram positivos no se
decoloran, mientras que los Gram negativos sí
lo hacen.
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11.
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TINCIÓN DE GRAM: PASOS
Para poner de manifiesto las células Gram
negativas se utiliza una coloración de contraste.
Habitualmente es un colorante de color rojo,
como la safranina o la fucsina. Después de la
coloración de contraste las células Gram
negativas son rojas, mientras que las Gram
positivas permanecen azules.
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12.
TINCIÓN DE GRAM: TÉCNICA
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 Realizar un frotis fino.
 Dejar secar.
 Fijar con metanol.
 Añadir Violeta de Genciana (1 minuto)
 Lavar con agua.
 Añadir Lugol
 Lavar con agua
 Decolorar con alcohol-acetona
 Lavar con agua
 Añadir colorante de contraste (1 minuto)
 Lavar con agua
 Dejar secar
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