Memorias Conferencia Científica Anual sobre Síndrome Metabólico 2017 - Programa Científico SIMPOSIO: Nuevos conceptos moleculares en la fisiopatología del síndrome metabólico y diabetes Fenotipo de exhaustación inmunológica en pacientes con obesidad Dr. Raúl Flores Mejía Investigador del Sistema Nacional de Investigadores, Inmunología Médica, Escuela Superior de Medicina, IPN

1. Fenotipo de agotamiento
“exhaustion” inmunológico en
pacientes con obesidad
Dr. Raúl Flores Mejía
Inmunología médica
ESM-IPN
9ª Conferencia científica anual sobre síndrome metabólico

2. El agotamiento en linfocitos T se describe como la disminución en la secreción de
citocinas y funciones efectoras (citotoxicidad). Este fenómeno esta descrito en
infecciones crónicas, autoinmunidad y en procesos tumorales.
Trends Immunol. 2014 February ; 35(2): 51–60
Fenotipo de agotamiento “exhaustion” inmunológico en pacientes con obesidad
Nat Immunol 2013; 14:1212-18
IL-6, Vía TLR-4
Cancer Biology & Therapy 11:1, 68-
70; 1, 2011
Eur. Jour. Immunol 2011. 41 286-
290
PNAS 2008 vol. 105 no. 30
10275–10276

3. Fenotipo de agotamiento “exhaustion” inmunológico en pacientes con obesidad
Nat Rev Immunol. 2011; 11(2): 85–97.
FFA
Curr Obes Rep. 2016 DOI 10.1007/s13679-016-0232-9
Expresión de
PD-1

4. Clin Ther. 2015 April 1; 37(4): 764–782. doi:10.1016/j.clinthera.2015.02.018.
Fenotipo de agotamiento “exhaustion” inmunológico en pacientes con obesidad
En linfocitos T
APC
A

5. ¿La obesidad, favorecerá el agotamiento de las células T y esto
provocará la alteración de las funciones efectoras normales de los
linfocitos T cooperadores y citotóxicos?
Grupo de Trabajo
Fenotipo de agotamiento “exhaustion” inmunológico en pacientes con obesidad
¿Existe un fenotipo de agotamiento en pacientes con obesidad?
“PD-1”

6. Hombres y mujeres de 18 a 60 años.
Que acepten participar en el estudio.
Fenotipo de agotamiento “exhaustion” inmunológico en pacientes con obesidad
Criterios de exclusión
• Infección aguda o latente sospechada durante la
exploración clínica.
• Diagnóstico previo de DM2.
• Diagnóstico previo de inmunodeficiencia primaria o
secundaria
Antecedente de quimioterapia o uso de inmunosupresores.
• Diagnóstico previo de enfermedad autoinmune
• Diagnóstico previo de enfermedad alérgica con
tratamiento previo o actual con inmunoterapia específica
con alérgenos.
• Diagnóstico previo de infección viral crónica por virus de
la inmunodeficiencia humana (VIH), virus de hepatitis B
(VHB) o C (VHC).
• Mujeres embarazadas.
• Que hayan sido sometidos a procedimiento quirúrgico
bariátrico.
Criterios de eliminación
• Que el paciente retire su consentimiento informado.
• Hallazgo en los estudios de laboratorio compatibles con
infección aguda. A saber: leucocitosis > 12 000 /μL y/o
proteína C reactiva > 20 mg/dL.
• Evidencia de inmunodeficiencia primaria no
diagnosticada previamente durante el estudio
inmunológico del sujeto.
Reclutamiento/Selección

7. Fenotipo de agotamiento “exhaustion” inmunológico en pacientes con obesidad
Muestra biológica.
4 mL de sangre periférica extraída por venopunción en sistema para extracción de sangre por vacío, en tubo con EDTA.
Se seleccionaron sujetos que acudieron a la Clínica de
Prevención en Diabetes (Dra. Adriana Monroy Guzmán) del
Hospital General de México “Dr. Eduardo Liceaga” y que
cumplieron los criterios de participación.
Tesis de maestría en Inmunología del Med Esp.
(M. en C.) José Israel León Pedroza
SSInv Esteban Hernández León
Protocolo
1. Tinción para citometría de flujo.
2. Adquisición-Lectura de muestras.
3. Análisis de resultados.

8. FSC-A FSC-A CD3 CD4
FSC-H
SSC-A
CD8 PD-1
CD45RACD45RA
CD45ROCD45RO
A B C D
E F
G H
Fenotipo de agotamiento “exhaustion” inmunológico en pacientes con obesidad
Estrategia de análisis para citometría de flujo
CD45RA Expresado en linfocitos T naive
CD45RO expresado en linfocitos T activados y de memoria

9. Obesidad y cambios inmunológicos
Fenotipo de agotamiento “exhaustion” inmunológico en pacientes con obesidad
Resultados
Peso normal
(n = 8)
Sobrepeso
(n = 7)
Obesidad
grado I
(n = 10)
Obesidad
grado II
(n = 4)
p
Leucocitos (cel./μL)
5357.5 (1004.6) 5758.3 (833.4) 7063.3 (1804.5) 6880 (28.3) 0.067
Linfocitos (cel./μL)
1685 (378.8) 2006.7 (398.4) 2088.9 (540.3) 2215 (346.5) 0.251
Monocitos (cel./μL)
441.3 (147.1) 363.3 (100.9) 423.3 (142.5) 345 (162.6) 0.652
Plaquetas (x103/μL) *
184.3 (42.1) 209.1 (19.4) 246.5 (42.8) 253.1 (21.8) 0.013*
CD3 (%)
53.7 (10.6) 65.8 (5.7) 58.5 (10.8) 63.3 (2.5) 0.145
CD3 (cel./μL)
902.1 (271.7) 1331.5 (356.5) 1239.4 (421.4) 1405.5 (273.7) 0.103
CD4 (%)
59.9 (8.5) 60.3 (10) 60.7 (14.9) 63.9 (0.7) 0.977
CD4 (cel./μL)
534.4 (168.8) 792.8 (225) 761.3 (342.6) 899 (185.3) 0.164
CD8 (%)
32.3 (5.1) 35.7 (10.4) 31.6 (11.8) 29.8 (0.9) 0.811
CD8 (cel./μL)
292.4 (93.9) 486.2 (212.5) 397.1 (215.6) 419.5 (94) 0.271
Relación CD4/CD8
1.9 (0.6) 1.9 (0.7) 2.4 (1.5) 2.2 (0) 0.751
Proteína C reactiva
(mg/L) 1.6 (0.4) 6.3 (4.8) 5.8 (3.9) 5.1 (2.0) 0.057
* p < 0.05. Media (desviación estándar). ANOVA de una vía.

10. Expresión de PD-1 en función del IMC
Fenotipo de agotamiento “exhaustion” inmunológico en pacientes con obesidad
Resultados

11. FMO FMO MuestraMuestra
Peso normal
Edad: 25 años
IMC: 24.3
PD-1PD-1
CD45RA
CD45RA
CD45RO
CD45RO
0.01 0.15 0.00
Expresión de PD-1 en linfocitos T CD4 y CD8, CD45RA y CD45RO
Fenotipo de agotamiento “exhaustion” inmunológico en pacientes con obesidad
Resultados
CD45RA
FMO
Obeso
Edad: 39 años
IMC: 38.5
PD-1
FMO Muestra
PD-1
Muestra
CD45RA
CD45RO
CD45RO
3.580.013.460.00 0.03
3.92

12. CD4
CD8
Expresión de PD-1 en función del IMC y CD45Ra y CD45RO
Fenotipo de agotamiento “exhaustion” inmunológico en pacientes con obesidad
Resultados
CD8PD1+CD45RA+(céls/mL

13. Expresión de PD-1 en función de la Resistencia a la insulina y
CD45RA/CD45RO
Fenotipo de agotamiento “exhaustion” inmunológico en pacientes con obesidad
Resultados
CD8PD1+CD45RO+(céls/mL

14. * *
Expresión de PD-1 en función del síndrome metabólico y
CD45RA/CD45RO
Fenotipo de agotamiento “exhaustion” inmunológico en pacientes con obesidad
Resultados
3 o más de los siguientes criterios:
Triglicéridos ≥ 150 mg/dL
HDL < 40 mg/dL en hombres, < 50
mg/dL en mujeres.
TA ≥ 130/85 mmHg
GLU ≥ 100 mg/dL
CINTURA: HOMBRES ≥ 102 cm,
MUJERES ≥ 88 cm

15. Fenotipo de agotamiento “exhaustion” inmunológico en pacientes con obesidad
Más que la obesidad, el síndrome metabólico, favorece el
fenotipo de agotamiento (PD-1) de las células T
CD4,CD45RA y RO.
¿Esto provocará la alteración de las funciones
efectoras normales de los linfocitos T
cooperadores y citotóxicos?

16. Fenotipo de agotamiento “exhaustion” inmunológico en pacientes con obesidad
Determinar la producción de IL-4, IFN-g y TNF-α de
linfocitos T CD4, CD45RA y CD45RO, PD-1 en pacientes
con obesidad y/o síndrome metabólico.
Evaluar la proliferación de linfocitos T CD4, CD45RA y
CD45RO, PD-1 en pacientes con obesidad y/o
síndrome metabólico.

17. Fenotipo de agotamiento “exhaustion” inmunológico en pacientes con obesidad
Dra. Adriana Monroy Guzmán
Hospital General de México
Clínica de Prevención en
Diabetes
Dr. Rommel Chacón Salinas
Escuela Nacional de Ciencias
Biológicas IPN
Laboratorio 103 Inmunología
Escuela Superior de Medicina
Dr. Octavio Rodríguez Cortés
M. en C. y Esp. José Israel León Pedroza
Med. Gral. Esteban León Hernández
M. en C. Jonathan García Bernal
M. en C. Ana Karen Hernández Colín
Med. Gral. Daniel Cabello Modesto
Med. Gral. Cinthia Gaona Aguas
SSInv. Erika Calderón Austria
UDIBI ENCB IPN
M. en C. Erick Espíndola Arriaga

19. Introducción y marco
teórico
Obesidad, resistencia a
la insulina y síndrome
metabólico
Efectos inmunológicos
de la obesidad
Linfocitos y
agotamiento
linfocitario
Antecedentes
Índice de sensibilidad a la insulina (Matsuda)=
10,000
𝐺𝑙𝑢0∗𝐼𝑛𝑠0 ∗ 𝐼𝑛𝑠 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑎∗𝐺𝑙𝑢 𝑀𝑒𝑑𝑖𝑎
HOMA-IR =
𝐺𝑙𝑢0∗𝐼𝑛𝑠0
405
Matsuda M, DeFronzo RA. Insulin sensitivity indices obtained from oral glucose
tolerance testing: comparison with the euglycemic insulin clamp. Diabetes Care.
1999;22(9):1462-70.
Matthews DR, Hosker JP, Rudenski AS, Naylor BA, Treacher DF, Turner RC. Homeostasis
model assessment: insulin resistance and beta-cell function from fasting plasma glucose
and insulin concentrations in man. Diabetologia. 1985;28(7):412-9.
Correlación Clamp HOMA-IR Matsuda
Clamp
HOMA-IR 0.88
Matsuda 0.73 0.69
Xiang AH, Watanabe RM, Buchanan TA. HOMA and Matsuda indices of insulin
sensitivity: poor correlation with minimal model-based estimates of insulin sensitivity in
longitudinal settings. Diabetologia. 2014;57(2):334-8.
Resistencia a la Insulina