Contexto, fundamentación teórica, clasificación, aplicaciones clínicas.

1. EVA BLANCO MOLINARES

2. 1. DEFINICIÓN.
2. REFERENTE LEGAL.
3. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA.
3.1 CONCEPTO DE SISTEMA INMUNE.
3.2 CONCEPTO DE RESPUESTA
INMUNE.
3.3 CONCEPTO DE ANTIGENO.
3.4 CONCEPTO DE ANTICUERPO.
3.5 IMPORTANCIA CLÍNICA DE LAS
CLASES DE INMUNOGLOBULINAS-
ANTICUERPOS.

3. 4 PRINCIPIO DEL
INMUNOENSAYO.
4.1 FASES DE LA
REACCIÓN.
4.2 FACTORES QUE
INCIDEN.
4.3 TÉCNICAS.
4.4. APLICACIÓN.
4.5. CONCLUSIÓN.

4. Son pruebas de laboratorio fundamentadas
en la reacción antigeno - anticuerpo, que
permiten hoy dia hacer el diagnóstico de
enfermedades endocrinas, infecciosas,
marcadores tumorales, fertilidad,
marcadores cardiacos, y control de drogas de
abuso y de uso restrigido.

5. Decreto 1011 de 2006: Sistema
General de Garantía de Calidad en
SGSSS.
NTC 5250: adopción idéntica por
traducción de la ISO 15189:2003
requisitos particulares para
calidad y competencia. Sistema de
Gestion de Calidad en el
laboratorio clinico.
Decreto 3518 del 6 de octubre de
2006. SIVIGILA.
Decreto 2323 del 12 de julio de
2006. Red de Laboratorios

6. Alejandro Gaviria tomó posesión ante el Presidente de
la República, Juan Manuel Santos Calderón, de su
cargo como nuevo Ministro de Salud y Protección
Social el 3 de septiembre de 2012. Fue ratificado para
el nuevo periodo.
A lo largo de su carrera profesional, Gaviria Uribe se
desempeñó como subdirector de Planeación Nacional,
subdirector e investigador asociado de Fedesarrollo, e
investigador en Washington del Banco Interamericano
de Desarrollo, entre otros cargos.
El nuevo Ministro tiene estudios de doctorado en
Economía de la University of California (EE.UU.) y de
maestría en Economía de la Universidad de Los Andes.
Al aceptar su designación como Ministro de Salud y
Protección Social, se desempeñaba como Decano de la
Facultad de Economía de la Universidad de Los Andes.
Tomado de la pagina web del MPS

7. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA
SISTEMA INMUNE
Conjunto de órganos,
células y moléculas
encargados de la
protección del
hospedero frente a
agresores externos e
internos, permitiendole
a los seres vivos
preservar su identidad
e integridad.
El Sistema Inmunitario es el sexto sentido. Permite reconocer el mundo microscópico
Imagen tomada de Google

8. Fuente: Regueiro

9. Imagen tomada de Regueiro

10. AGRESOR
BARRERAS
NATURALES.
PROCESOS:
INFLAMACIÓN
FAGOCITOSIS.
FIJACIÓN DE
COMPLEMENTO
CÉLULAS DE
MEMORIA
ANTICUERPOS
C
I
T
O
C
I
N
A
S
INMUNOENSAYOS INMUNOENSAYOS
HLA
CPA
LT
LB

11. RESPUESTA INMUNE
Es el resultado de
las interacciones
de órganos,
células y
moléculas del
sistema inmune
frente al agresor.
El sistema inmunitario evolucionó bajola presión selectiva impuesta porlos agentes patógenos.

12. TIENE DOS MOMENTOS:
1. El inmediato, al
contacto con el agresor,
llamada respuesta
innata.
2. Uno posterior al
contacto, en donde se
requiere aprender
acerca del agresor y
que se denomina
adaptativa o específica.
RESPUESTA INNATA
RESPUESTA ADAPTATIVA

13. En los dos momentos de la respuesta
inmunitaria, la detección de anticuerpos
difiere, debido a que está en relación
con la clase de inmunoglobulina que se
sintetiza:
ENTRE EL DÍA 0 A 10: IgM
ENTRE EL DÍA 7 A 15:IgG

16. Imágenes tomadas de Google

17. DEFINICIONES
ANTÍGENO
INMUNÓGENO
EPÍTOPE
Imágenes tomadas de Google

18. ANTÍGENOS
INMUNÓGENOSEPÍTOPES

19. SUPERATIGENOS:
CARACTERÍSTICAS:
1. Se unen externamente
al TCR y a las HLA II
2. Activan hasta un 20%
de los LT.
3. Responsables del shock
séptico.
Ejemplos:
Estafilococo aureus,
Estreptococo pyogenes,
Yersinias,
Micoplasmas,
Retrovirus.
27/08/2015 19
Imagen tomada de Google

20. 27/08/2015 20
ORÍGEN
COMPLEJIDAD ESTRUCTURAL
DÓSIS
VÍA DE ADMINISTRACIÓN
ESTADO FÍSICO DEL HOSPEDERO
Imágenes tomadas de Google

21.  Además de la naturaleza química, es
importante la estructura de la molécula
(Primaria, secundaria) a.a terminal,
secuenciación, composición de las
cadenas laterales, entre otros.
 Que sean levógiros y que estén cargados
electricamente.
27/08/2015 21

22. SECUENCIALES: depende de la
estructura primaria.
CONFORMACIONALES: depende
de la forma tridimensional.
INMUNODOMINANTES: son
aquellas regiones contra las cuales se
produce la mayor parte de los
anticuerpos.
OCULTOS. se evidencia cuando el
antigeno se desnaturaliza.
27/08/2015 22

23. 27/08/201523

24. 1. RNA bicatenario que poseen los virus
en proceso de multiplicación.
2. Secuencias de ADN cpg sin metilar, que
aparecen en las bacterias.
3. Rasgos propios de las proteínas
presentes en las bacterias y otros
microbios, como su inicio por n-
formilmetionina.
4. Lipopolicaridos (LPS) de las bacterias
gram negativas.
5. Ácidos teicóicos de las bacterias gram
positivas.
6. Oligosacaridos que llevan manosa,
existentes en los las glicoproteínas
microbianas.Imágenes tomadas de Google

26. Comensalismo.
Mutualismo.
Parasitismo.
27/08/2015 26
DIGA EL CONCEPTO Y DE EJEMPLOS

27.  ¿Cuál es la razón
para que algunas
personas estando en
contacto con los
agentes causales de
enfermedad, no la
desarrollen?
27/08/2015 27
Imagen tomada de Google

28. DEFINICIÓN.
ESTRUCTURA.
FUNCIÓN.
ACCIONES.
Imagen tomada de Google

29. Vs InmunoglobulinasAnticuerpos
Imágenes tomadas de Google

30. Fuente: Regueiro

31. Fuente: Regueiro

32. Fuente: Regueiro

33. CARACTERÍSTICAS DE LAS DIFERENTES CLASES DE IGS

34. FIG 10-17

36. INMOVILIZACIÓN.
OPSONIZACIÓN.
HEMÓLISIS.
NEUTRALIZACIÓN.
CITÓLISIS.
Imagen tomada de Google

37. Fuente: Regueiro

39. Detectar enfermedades en etapa subclinica.
Confirmar diagnóstico sospechado
clínicamente.
Diferenciar enfermedades con similares
presentación clínica.
Predecir el pronóstico de una enfermedad.
vigilar el tratamiento.
Precisar factores de riesgo.
Apoyar actividades de promoción y
prevención.
Detectar y confirmar alteraciones de los
mecanismos de defensa.
JUSTIFICACIÓN DE LOS INMUNOENSAYOS

40. EL MÉDICO ENVIA AL PACIENTE
AL LABORATORIO PORQUE
NECESITA
INFORMACIÓN, PARA TOMAR
DECISIONES ADECUADAS.
EN ÚLTIMAS Y EN ESENCIA
Imagen tomada de Google

41. Especificidad.
Sensibilidad.
Precisión.
Rapidez.
Versatilidad.
Con la última generación: control de calidad en
tiempo real; muestras pediátricas; autodilución;
software amigable con ayuda permanente y
tutorial en línea; amplio menú disponible;
reactivos de excelente calidad y con consumo
mínimo; manos libres.

42. ANTÍGENO + ANTICUERPO
REACCIÓN VISIBLE.
PRINCIPIO DEL
INMUNOENSAYO

43. UNIÓN DEL ANTIGENO CON EL
ANTICUERPO POR INTERACCIÓN
FÍSICO-QUÍMICA ENTRE LAS
MOLÉCULAS.
VISUALIZACIÓN DE LA UNIÓN.

44. Fuente: Regueiro

45. FACTORES QUE INCIDEN
INTRÍSECOS O INMODIFICABLES
Edad-Raza- Género.
Altitud.
Embarazo.
Ciclos biológicos- Cronobiología
Fase de la enfermedad.
Memoria inmunológica.
Manipulación del sistema inmune:
Inmunosupresión, vacunación,
Inmunización pasiva,
inmunopotencialización.
Imagen tomada de Google

46. Temperatura.
Ph.
Concentración de electrolitos.
Carga Eléctrica
Agitación.
Tiempo.
Proporción antígeno-anticuerpo.
FACTORES QUE INCIDEN
EXTRÍNSECOS O MODIFICABLES

47.  AFINIDAD: se refiere a la energía de enlace
potencial contenida en cada uno de los sitios Fab;
las interacciones están determinadas por el
número y grupos químicos reactivos, presentes
en el sitio de combinación y por la especificidad
del anticuerpo.
 ÁVIDEZ: es el grado de ligazón entre el
anticuerpo y su respectivo antigeno.
De la avidez dependerá la velocidad con que se
visualice la unión antígeno anticuerpo.
Los anticuerpos clase Ig M tienen mayor ávidez
que los de la clase Ig G.
DEFINICIÓN DE CONCEPTOS

48.  HETEROGENEIDAD DE LA RESPUESTA:
basada en el hecho de que una molécula de
antígeno puede ser capaz de estimular la
síntesis de distintas tipos de anticuerpos, de
acuerdo al número de inmunógenos y
epitopes que tenga.
 REACTIVIDAD CRUZADA: el anticuerpo
puede ligarse al epitope que lo originó o a
otro similar. Se presenta cuando hay
similitud estructural entre los ANTÍGENOS.
DEFINICIÓN DE CONCEPTOS

49. Fuente: Regueiro

50.  REACCIÓN DE PRECIPITACIÓN:
MEDIO LIQUIDO- FLOCULACIÓN
MEDIO SÓLIDO CELULOSA:
INMUNOPRECIPITACIÓN.
MEDIO SÓLIDO AGAROSA:
INMUNODIFUSIÓN, IDR,
ELECTROINMUNODIFUSIÓN,
INMUNOELECTROFERESIS,
CONTRAINMUNOELECTROFORESIS.

51. REACCIÓN DE AGLUTINACIÓN:
 ACTIVA.
 PASIVA.
 REACCIÓN DE NEUTRALIZACIÓN.
 REACCIÓN DE HEMÓLISIS POR FIJACIÓN
DEL COMPLEMENTO.
INMUNOENSAYOS DE MARCAJE:
 ELISA, RIA, QUIMIOLUMINISCENCIA.
 INMUNOHISTOQUIMICA.
 INMUNOFLUORESCENCIA.
 QUIMIOLUMINISCENCIA.
 CITOMETRIA DE FLUJO.

52. AGLUTININAS.
PRECIPITINAS.
HEMOLISINAS.
ANTICUERPOS
NEUTRALIZANTES.
ANTICUERPOS
FLOCULANTES.
ANTICUERPOS
FIJADORES DEL
COMPLEMENTO.

54.  DROGAS TERAPEUTICAS Y DE
ABUSO: anticonvulsionantes;
estimulantes; benzodiacepinas;
barbitúricos.
 ENFERMEDADES AUTOINMUNES:
ANA; ANCA; ENA; SSA; SSB;
CARDIOLIPINA; GLIADINA;
MIELOPEROXIDASA; FACTOR
REUMATOIDE;
ANTITIROGLOBULINA

55.  INFECTOLOGIA: GRUPO
TORCHS; MARCADORES
DE HEPATITIS; VARICELA;
SARAMPIÓN; PAPERAS;
VIH; EPSTEIN BARR;
MICOPLASMA;
LEGIONELLA;
HELICOBACTER PYLORI; B.
BURGDORFERI
Imagen tomada de Google

56.  DETERMINACIÓN DE
HORMONAS: TIROIDES,
GLÁNDULAS SUPRARENALES,
PANCREAS, GONADAS,
PARATIROIDES, CRECIMIENTO
Y DESARROLLO.
 MARCADORES TUMORALES:
AFP; ACE; PSA TOTAL Y LIBRE;
BETA HCG; BETA 2
MICROGLOBULINA; CA 15.3;
CA125.
Imágenes tomadas de Google

58. APLICABILIDAD:
OPORTUNIDAD.
COSTO.
SEGURIDAD.
COMPLEJIDAD.
CONFIABILIDAD:
SENSIBILIDAD.
ESPECIFICIDAD.
EXACTITUD.
PRECISIÓN.
SELECCIÓN DE LAS PRUEBAS

59. ESPECIFICIDAD
Son útiles para
confirmar un diagnóstico
sugerido por otras
pruebas.
La especificidad hace
que casi no se obtengan
resultados positivos,
cuando la enfermedad
está ausente.
No debe producir
Falsos Positivos (FP).
Su utilidad es mayor
cuando es positivo.
Capacidad de la prueba
De detectar y cuantificar
el analito en estudio
sin dar falsos positivos.
Proporción de individuos
sanos, que son identificados
correctamente por la prueba.

60. Es usualmente positivo en
presencia de la enfermedad, aún
en etapas tempranas.
No debe dejar por fuera de la
detección ningún positivo.
Puede tener falsos Positivos
(FP)
Son útiles cuando la
probabilidad de la enfermedad es
baja y el fin es descubrirla.
Su utilidad es mayor cuando
es negativa.
Capacidad de la prueba
de detectar concentraciones
Mínimas de un analito.
Proporción de individuos
con la enfermedad que son
identificados correctamente
por la prueba.
SENSIBILIDAD

61. Condiciones de las
Muestras para los análisis
Homogénea
Representativa
Sin cambios químicos, físicos ni microbiológicos
Cadena de frío
Seguridad
Preservación

63. FUNDAMENTO
La reacción ocurre por la
interacción que se da entre un
antígeno y un anticuerpo, siendo
los dos macromoléculas solubles.

64. Precipitación
Consisten en la formación de un precipitado
visible (insolubilización) cuando se encuentra
un Ag y sus Acs homólogos en solución
formando el complejo Ag+Ac
CARACTERÍSTICAS
- Reacciones muy específicas, aunque poco sensibles.
-Aplicación en investigación,
- Realización en m. líquido, o mas frecuentemente en medio
sólido en geles de agar o acetato de celulosa.

66. Tipos de Reacciones de Precipitación
2.- Inmunodifusión doble en placa ( Ouchterlony)
• Enfrentamiento de los componente inmunes en un gel de agar.
• La difusión cruzada de los reactivos da lugar a bandas o líneas
de precipitación.
• Muy útil para estudio de la semejanza o similitud de antígenos
1.- Inmunodifusión simple en placa ( Mancini)
• El Ag o el antisuero se incorpora a la agarosa fundida
• Una vez solidificada se coloca el suero o el Ag en pocillos
tallados en la capa de agarosa.
• Se produce una difusión radial del componente situado en el
pocillo, que da lugar a una línea de precipitación circular de
diámetro proporcional a la concentración del mismo

67. 3.- Inmunoelectroforesis
Método que combina la electroforesis del Ag con una técnica de
precipitación en gel
Aparición de bandas de precipitación (una por sistema Ag-Ac) de
localización y morfología características.
Poco uso en inmunodiagnóstico
Tipos de Reacciones de Precipitación
4.- Contrainmunoelectroforesis o electrosinéresis
Enfrentamiento del Ag y del suero en un gel de agar favorecido por
el efecto de la corriente eléctrica
Migración cruzada y “acelerada”. Presencia de líneas de
precipitación.

68. Suero
Antígeno 1
Antígeno 6
Antígeno 5
Antígeno 4
Antígeno 3
Antígeno 2
Doble difusión en gel
(Ouchterlony)
Post-coloración
Cada línea de pp= un sistema Ag-Ac

69. FIG 15-7

70. Anti-Ig (Ac)
Ag (Ig)
Precipitación en Agarosa

71. Ag
Ag Ag
Ag
Ac

72. AgX´AcX
AcX
AgX
AgX
AcXY
AgX
AgY
IDENTIDAD
IDENTIDAD PARCIAL SIN IDENTIDAD
INMUNODIFUSIÓN LINEAL

73. Fuente: Regueiro

74. Cuantificar las inmunoglobulinas y otras
proteínas plasmáticas
Diagnostico de Inmunodeficiencias primarias
o secundarias
Hipogammablobulinemía severa
Parasitosis tisulares
Enfermedades linfoproliferátivas
Hepatopatías
LES

76.  Se fundamenta en una electroforesis de
proteínas en geles de acrilamida y su
posterior transferencia a un soporte
sólido (nitrocelulosa o nylon).
 La identificación de las proteínas a
estudiar se realiza por incubación de la
membrana o soporte con anticuerpos
específicos marcados con enzimas o
isotopos radioactivos.

77. Fuente: Regueiro

78. FUNDAMENTO:
Cuando la acción del Anticuerpo
está dirigida a epitopes, que
estén en la superficie de células o
hacen parte de membranas de
microorganismos, el Anticuerpo
produce la agregación de las
diferentes células, dando lugar a
la aglutinación.

80. Reacción de Aglutinación
Prueba de aglutinación de látex

81. Con frecuencia los anticuerpos se unen a los
epitopes de la superficie de los eritrocitos,
pero no pueden formar la malla de la
aglutinación. La presencia de estos Acs se
pueden poner en evidencia usando un Ac
contra la IgG humana, el cual es producida en
el conejo.

82. OBTENCIÓN DEL SUERO DE COOMBS

84. DETECTAR CANTIDADES NO
AGLUTINANTES DE ANTICUERPOS
ANTIERITROCITOS.
DIAGNÓSTICO DE:
 ANEMIAS HEMOLÍTICAS
AUTOINMUNES.
 ERITROBLASTOCIS FETAL.
EN BANCO DE SANGRE:
 RASTREO DE ANTICUERPOS.
 PRUEBA CRUZADA.
 VARIANTE DU

85. FUNDAMENTO:
Cuando los dos reaccionantes son solubles, se
puede transforma una reacción de
precipitación en una da aglutinación usando
partículas de látex, carbón o Bentonita a las
que se adhieren ya sea el antígeno o el
anticuerpo. De esta manera se podrá detectar
en el suero de los paciente las moléculas que se
comportan como antígeno o como anticuerpos.

86. Dada la sencilles y rápidez con que se
realizan estas pruebas, son catalogadas la
mejor opción en el Inmunodiagnóstico de
baja complejidad.
Son útiles para apoyar el diagnóstico de la
PCR, el FR, anticuerpos antiestreptolisina O
determinación de HGC, tamizaje para sífilis
(RPR)

89. NO SON PRUEBAS CUANTITATIVAS.
REQUIEREN DE CANTIDAD
SUFICIENTE DEL ANALITO, POR
ELLO UN REPORTE NEGATIVO, NO
DESCARTA PATOLOGÍA.

90. 1. Actividad hemolítica total (CH50 – CH100)
2. Cuantificación individual de C3, C4 y C1q esterasa
inhibidora
 C3
 C4
 C3 y C4 = normales
 Actividad total
Indica activación sostenida del sistema,
por cualesquiera de las tres vías.
Indica que la activación del sistema
está ocurriendo por la vía alterna o
lectinas.
Dosificar individualmente
los demás factores

91. FIJACIÓN DE COMPLEMENTO

92. www.inmuneva.blogspot.com
evablanco2807@gmail.com
Eva Blanco Molinares