Este documento presenta las instrucciones para una práctica de laboratorio sobre la preparación de medios de cultivo. Explica que los medios de cultivo son esenciales para permitir el crecimiento de microorganismos y deben prepararse y usarse de manera controlada para asegurar resultados exactos. Detalla los tipos de medios, cómo clasificarse, y los procedimientos para preparar medios a partir de productos deshidratados de manera aseptica y tomar muestras para incubar y observar el crecimiento bacteriano.

1. FUNDACION UNIVERSITARIA DE POPAYAN
LABORATORIO DE SISTEMATICA Y ECOLOGIA
DE MICROORGANISMOS
PRACTICA # 3
Guía No. 3
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Versión 1.1
PRACTICA # 3 PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
1. INTRODUCCIÓN
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones
adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los
microorganismos.
Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un
control en su fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la exactitud,
confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos.
En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de
cultivo que pueden ser preparados en forma líquida o en forma sólida.
Usualmente para preparar un medio sólido, se parte de un medio líquido al que se
le añade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la sílicagel.
Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus
constituyentes en:

Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de
origen animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la
adición de minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los
componentes, ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos.

Medios definidos o sintéticos: son los medios que tienen una composición
química definida cuali y cuantitativamente. Generalmente se usan en
trabajos de investigación.
De acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos se clasifican en:


Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen el
crecimiento de un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar
el número de microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o
más sustancias inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con
excepción de los que se quieren cultivar.
Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian
por ser medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de
microorganismos específicos.

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Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos
derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen
ningún tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar
características fisiológicas de los microorganismos.
Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada
uno de sus constituyentes básicos, o por simple rehidratación de productos
asequibles
comercialmente
(medios
de
cultivo
deshidratados).
Generalmente se prefiere el uso de los medios de cultivo deshidratados
porque, además de simplificar el trabajo, con ellos se tiene mayor
probabilidad de obtener resultados reproducibles.
Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de
sus constituyentes básicos, o por simple rehidratación de productos asequibles
comercialmente (medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el
uso de los medios de cultivo deshidratados porque, además de simplificar el
trabajo, con ellos se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles.
2. OBJETIVOS

Preparar adecuadamente medios de cultivo a partir de medios de cultivo
deshidratados.

Indicar el método de esterilización apropiado.
3. CONSULTAS PRELIMINARES

Glosario. Define los siguientes términos.










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
Factor de crecimiento
Elemento traza
Macronutrientes
Micronutrientes
Peptona
Triptona
Extracto de levadura
Indicador de pH
Autoclave
Campana de flujo laminar
Haz un diagrama de flujo del procedimiento a seguir en esta práctica.
Haz un esquema de una autoclave, indicando como funciona.

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¿Cuáles son los métodos de esterilización más utilizados en microbiología?
¿En qué tipo de materiales se aplica cada uno?
Explique cuáles son las diferencias entre los procesos de esterilización
desinfección y asepsia
¿Cómo se relacionan estos procedimientos con la pasteurización?
4. MATERIALES Y REACTIVOS
4.1 Material que debe llevar cada estudiante
 1 Litro de alcohol al 70% (grupo)
 1 Litro de hipoclorito (grupo)
 Papel adhesivo microfilm
 Hisopos un paquete. 20 o más.
 Toallas absorbentes cocina
 Guantes
4.2 Material suministrado por el laboratorio
 3 cajas de petri con tapa
esterilizadas y selladas
 Mechero bunsen
 Trípode
 Rejilla
 Toallas absorbentes de cocina
nuevas empacadas.
 Agua embotellada 1 Litro
 Tapabocas
 Solución salina 30mL (sirven las
gotas nasales)





Varilla de vidrio
Vidrio reloj
Balanza analítica
Espátula
Matraz 250 mL
4.3 Reactivos
 Agar
5. PROCEDIMIENTO
5.1 Técnicas asépticas
Limpie la superficie de la mesa con alcohol al 70%.
5.2 Técnicas de preparación de medio de cultivo





Leer cuidadosamente las instrucciones de preparación del medio de cultivo
asignado
Pesar la cantidad exacta del medio deshidratado
Cerrar inmediatamente el frasco de medio de cultivo.
Disolver la porción pesada de acuerdo con las indicaciones del fabricante.
Si es necesario calentar se debe tener cuidado de no sobrecalentar.

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Distribuir el medio de cultivo de acuerdo a las indicaciones señaladas por el
profesor.
 No destapar las cajas de petri, sino hasta el momento que vayan a
ser utilizadas. Es conveniente colocarse un cubre bocas la
persona que va a realizar el vaciado y evitar hablar en todo
momento para no contaminar el medio de cultivo.
 Es conveniente mantener el mechero encendido y trabajar cerca
del área estéril al momento del vaciado en las cajas de petri.
Levantar la tapadera de la caja petri con la mano izquierda , sin
soltarla y sin retirarla demasiado de la base de la misma caja
mientras que con la mano derecha tomar el matraz que contiene el
medio de cultivo y realizar el vaciado de aproximadamente 15 ml.
A 20 ml de Agar por caja procurando que no se forman burbujas,
se procede a tapar la caja inmediatamente.
 Si se forman burbujas, tomar el mechero, flamear el medio de
cultivo sobre la superficie de la caja de petri y de manera rápida.
Se procede a tapar la caja.
 Esperar a que el medio solidifique, Se rotulan los medios de
cultivo, anotando la fecha y con iniciales el tipo de medio de
cultivo.
5.3 TOMA DE MUESTRAS
MICROORGANISMOS DEL AIRE


Destapar una caja de petri con agar nutritivo en cualquier lugar del laboratorio
Dejarla expuesta por 15 minutos, después tapar adecuadamente
MICROORGANISMOS EN SUPERFICIES

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

Tomar un copo de algodón humedecido en solución salina
Frotar sobre una superficie del laboratorio (mesa, suelo, pared)
Aplicar la torunda sobre un extremo del medio de cultivo en la caja de petri
Hacer estrías en toda la superficie sin romper el medio de cultivo

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MICROBIOTA DEL CUERPO HUMANO
MANOS





Sin lavarse las manos, colocar los dedos sobre el agar nutritivo de una caja de
petri, haciendo círculos en la superficie
Enjuagar sus manos con agua del grifo, sin usar jabón
Colocar los dedos sobre el agar de otra caja de petri y realizar la acción
anterior
Lavar sus manos con agua, jabón y cepillo
Colocar sobre la superficie del agar de otra caja de petri y proceder de igual
manera que en las dos anteriores
MUCOSAS


Introducir una torunda de algodón humedecida en solución salina estéril en las
fosas nasales o en la cavidad bucal.
Proceder como en el caso anterior
BLANCO
Al lado del mechero, destape cuidadosamente el tubo de agua destilada estéril y
con el asa tome una gota y raye suavemente la superficie del agar como lo
muestra la gráfica, teniendo la precaución de no romper la superficie del medio de
cultivo .

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Una vez realizados los procedimientos, tenga en cuenta lo siguiente:


Rotular con la información necesaria en la base de la caja de Petri (parte
externa)
Incubar a 35 ± 2 ªC durante 24 a 48 horas, teniendo la precaución de colocar la
caja invertida tal como se le ha indicado.
6. RESULTADOS
Lleve un registro de todos los cambios observados sobre el medio de cultivo,
describiendo el crecimiento de las colonias, sus colores, formas y texturas, con
base en los gráficos anexos. Diferencie los resultados para cada uno de los
orígenes de muestras. Para efectos de descripción del crecimiento de las colonias,
utilice el material anexo.
Preserve las cajas de Petri para la toma de muestras en próxima práctica de
laboratorio.
Describa el crecimiento bacteriano a las:
24 – 36 y 48 horas
Blanco
Colonia
Frotis 1
Forma
Frotis 2
Borde
Frotis 3
Elevación
Superficie

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7. BIBLIOGRAFIA
ALZATE, Rubén. Microbiología: Prácticas de laboratorio. Universidad Nacional de
Colombia. Sede Palmira. 1996.
BENSON, HAROLD. 1981. Microbiological applications. A laboratory manual in
general microbiology. Wm. C. Brown Company Publishers. Iowa.
Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiología. Manual de Métodos
Generales (2da edición). Facultad de Farmacia. Universidad Central de
Venezuela.
Difco y BBL. 2003. Manual de Medios de Cultivo Microbiológicos.
Adaptado por:
Adriana Marcela Peña Quina
Bióloga – Docente programa
Ecología
Revisado por:
Arnol Arias
de Biólogo – Coordinador de laboratorio

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ANEXO 1
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