Enzimología: Estudio de la Actividad de L-lactato: NAD+ Oxidos-Reductasa en el Higado del Animal de Experimetación.
UDO Bolívar.
Por:
Br. Durant, Carlos
Br. Lunar, Xiolimar
Br. Rodríguez, Jorge
Br. Velásquez, Karina
El documento describe un experimento de cuatro tubos de ensayo que contenían diferentes mezclas de enzimas, coenzimas, sustratos y otros reactivos. Solo el tubo número 2, que contenía enzima, coenzima, cianuro de potasio, lactato, azul de metileno y agua, experimentó un cambio después de tres horas en el baño serológico, disipando el azul de metileno. Esto se debió a que este tubo proporcionó el ambiente ideal para que ocurriera la reacción bioquímica
Este documento describe el proceso de precipitación de proteínas en la sangre mediante el método de "salting out". Se utiliza sulfato de amonio en dos concentraciones distintas (30% y 70% de saturación) para precipitar e insolubilizar las proteínas de la sangre sin desnaturalizarlas. El proceso implica la extracción de sangre, separación del plasma y los componentes celulares, y la adición gradual de sulfato de amonio al plasma y la hemoglobina para inducir la precipitación de las proteínas.
Este documento presenta información sobre proteínas y aminoácidos. Explica que las proteínas son polímeros de aminoácidos que cumplen funciones diversas en el cuerpo. Describe los cuatro niveles de estructura de las proteínas (primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria) y los tipos y clasificaciones de aminoácidos y proteínas. También cubre temas como la desnaturalización y las proteínas plasmáticas.
1) El documento describe un método para separar albúmina y globulinas en suero sanguíneo mediante el proceso de "salting out". 2) Este proceso involucra aumentar la fuerza iónica de la solución con sulfato de amonio para precipitar las globulinas. 3) Los resultados incluyen cantidades de albúmina, globulinas y proteínas totales en el suero, las cuales se encuentran por encima de los valores normales indicando anormalidades en la muestra.
Una enzima es una proteína que cataliza las reacciones
bioquímicas del metabolismo. Las enzimas actúan sobre
las moléculas conocidas como sustratos y permiten el
desarrollo de los diversos procesos celulares
Este documento describe los zimógenos, que son proteínas precursoras inactivas que se activan mediante la hidrólisis de enlaces péptidos específicos por enzimas proteolíticas llamadas enzimas operadoras. Los procesos de digestión y coagulación sanguínea están regulados por la activación secuencial de zimógenos. Las enzimas digestivas pancreáticas como tripsina, quimotripsina y proteasas se sintetizan inicialmente como zimógenos inactivos y son activados en cascada por otras en
El documento describe las principales enzimas séricas, incluyendo sus nombres, abreviaturas, rangos normales y órganos o tejidos de donde provienen. Explica que las enzimas séricas pueden ser específicas de plasma, glandulares o celulares, y clasifica las celulares como uniloculares (citoplasmáticas o mitocondriales) o biloculares. También distingue entre enzimas funcionales y no funcionales, e incluye ejemplos de enzimas de secreción y del metabolismo intermedio
Este documento presenta un informe de prácticas de enfermería sobre la determinación de glucosa. Explica que la glucosa es la principal fuente de energía celular y que su nivel en la sangre está regulado por las hormonas insulina y glucagón. Luego, detalla los procedimientos teóricos y prácticos para medir los niveles de glucosa en sangre, incluyendo la toma de muestras, los diferentes métodos analíticos y las recomendaciones para la prueba. El objetivo es capacitar a los estudiantes
El documento describe un experimento de cuatro tubos de ensayo que contenían diferentes mezclas de enzimas, coenzimas, sustratos y otros reactivos. Solo el tubo número 2, que contenía enzima, coenzima, cianuro de potasio, lactato, azul de metileno y agua, experimentó un cambio después de tres horas en el baño serológico, disipando el azul de metileno. Esto se debió a que este tubo proporcionó el ambiente ideal para que ocurriera la reacción bioquímica
Este documento describe el proceso de precipitación de proteínas en la sangre mediante el método de "salting out". Se utiliza sulfato de amonio en dos concentraciones distintas (30% y 70% de saturación) para precipitar e insolubilizar las proteínas de la sangre sin desnaturalizarlas. El proceso implica la extracción de sangre, separación del plasma y los componentes celulares, y la adición gradual de sulfato de amonio al plasma y la hemoglobina para inducir la precipitación de las proteínas.
Este documento presenta información sobre proteínas y aminoácidos. Explica que las proteínas son polímeros de aminoácidos que cumplen funciones diversas en el cuerpo. Describe los cuatro niveles de estructura de las proteínas (primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria) y los tipos y clasificaciones de aminoácidos y proteínas. También cubre temas como la desnaturalización y las proteínas plasmáticas.
1) El documento describe un método para separar albúmina y globulinas en suero sanguíneo mediante el proceso de "salting out". 2) Este proceso involucra aumentar la fuerza iónica de la solución con sulfato de amonio para precipitar las globulinas. 3) Los resultados incluyen cantidades de albúmina, globulinas y proteínas totales en el suero, las cuales se encuentran por encima de los valores normales indicando anormalidades en la muestra.
Una enzima es una proteína que cataliza las reacciones
bioquímicas del metabolismo. Las enzimas actúan sobre
las moléculas conocidas como sustratos y permiten el
desarrollo de los diversos procesos celulares
Este documento describe los zimógenos, que son proteínas precursoras inactivas que se activan mediante la hidrólisis de enlaces péptidos específicos por enzimas proteolíticas llamadas enzimas operadoras. Los procesos de digestión y coagulación sanguínea están regulados por la activación secuencial de zimógenos. Las enzimas digestivas pancreáticas como tripsina, quimotripsina y proteasas se sintetizan inicialmente como zimógenos inactivos y son activados en cascada por otras en
El documento describe las principales enzimas séricas, incluyendo sus nombres, abreviaturas, rangos normales y órganos o tejidos de donde provienen. Explica que las enzimas séricas pueden ser específicas de plasma, glandulares o celulares, y clasifica las celulares como uniloculares (citoplasmáticas o mitocondriales) o biloculares. También distingue entre enzimas funcionales y no funcionales, e incluye ejemplos de enzimas de secreción y del metabolismo intermedio
Este documento presenta un informe de prácticas de enfermería sobre la determinación de glucosa. Explica que la glucosa es la principal fuente de energía celular y que su nivel en la sangre está regulado por las hormonas insulina y glucagón. Luego, detalla los procedimientos teóricos y prácticos para medir los niveles de glucosa en sangre, incluyendo la toma de muestras, los diferentes métodos analíticos y las recomendaciones para la prueba. El objetivo es capacitar a los estudiantes
Tema 19 bacterias acido alcohol resistentesCat Lunac
Este documento describe las características de las micobacterias, en particular Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium leprae. M. tuberculosis causa la tuberculosis, que se transmite por vía aérea y puede afectar principalmente los pulmones. M. leprae causa la lepra, que se transmite por contacto directo y afecta principalmente la piel y los nervios periféricos. El documento cubre la morfología, cultivo, patogenicidad y diagnóstico de estas micobacterias.
Este documento describe diferentes tincciones ácido-resistentes utilizadas para identificar bacterias y protozoos. Explica los protocolos de las tincciones de Ziehl-Neelsen, Kinyoun y Auramina-Rodamina, incluyendo los reactivos, procedimientos y organismos que identifican. También resume las principales diferencias entre estas tincciones en términos de mordientes, decolorantes, contraste, necesidad de calor y facilidad de identificación de organismos.
Este documento presenta un informe de prácticas de laboratorio sobre la determinación de glucosa. Explica la importancia de la glucosa, el proceso de realizar la prueba, y los procedimientos de laboratorio para medir los niveles de glucosa en la sangre usando un método enzimático. El objetivo es capacitar a los estudiantes para que puedan conocer y determinar el valor de la glucosa en sangre a través de un análisis objetivo.
Este documento describe dos tipos de sustancias que interfieren con la cadena respiratoria: inhibidores, que detienen el transporte de electrones al bloquear componentes de la cadena, y desacopladores, que no detienen el transporte de electrones pero disipan el gradiente de protones. Se mencionan ejemplos específicos como el cianuro y la oligomicina como inhibidores, y el 2,4-dinitrofenol como desacoplador.
Este documento presenta información sobre la tinción de Gram y la tinción de Ziehl-Neelsen, dos técnicas utilizadas para identificar bacterias. Explica los pasos de cada tinción, incluyendo el uso de colorantes y solventes específicos, y cómo esto permite distinguir entre bacterias Gram-positivas y Gram-negativas en el caso de la tinción de Gram, y la identificación de micobacterias en la tinción de Ziehl-Neelsen.
El documento describe la membrana y el metabolismo del eritrocito. Los eritrocitos contienen hemoglobina y carecen de organelos, pero sintetizan ATP a través de la glucólisis. La membrana del eritrocito está compuesta por proteínas, lípidos y carbohidratos que controlan sus funciones de transporte y flexibilidad. La espectrina es la proteína principal del citoesqueleto y se conecta a la membrana a través de la anquirina y la proteína 4.1.
Este documento describe un método de extracción de ADN llamado salting-out. El método utiliza reactivos de baja toxicidad para lisar las células, lavar el pellet celular y precipitar el ADN genómico con alcohol isopropílico, permitiendo visualizar la hebra de ADN. El protocolo consta de 14 pasos que incluyen lisis celular, lavado del pellet, tratamiento con proteasa K y precipitación del ADN con sal y alcohol.
Este documento describe un protocolo para la extracción de ADN de sangre periférica utilizando el método CTAB. El protocolo implica la lisis celular y nuclear, precipitación de proteínas y ADN, y posterior purificación e hidratación del ADN aislado. El objetivo era extraer ADN de una muestra de sangre y comprender el proceso de aislamiento de ácidos nucleicos. Al aplicar el método, se observó la transformación del pellet y la obtención final de ADN en forma de grumos blanquecinos.
Este documento presenta un resumen de las enzimas. Comienza con definiciones generales sobre enzimas y catalizadores. Luego describe la clasificación y nomenclatura de las enzimas, así como su estructura y cofactores. Explica el mecanismo de acción de las enzimas, incluyendo su sitio activo, la disminución de la energía de activación y los grupos catalíticos. Finalmente, aborda conceptos de cinética enzimática como la velocidad de reacción, los efectos de la concentración de sustrato
Este documento describe un procedimiento para determinar la concentración de triglicéridos en suero humano. Se utilizan reactivos químicos y un espectrofotómetro para medir la absorbancia a 510 nm de muestras, un calibrador y un blanco. Los resultados se usan en una fórmula para calcular la concentración de triglicéridos, la cual se encontró dentro de los valores normales para el paciente. El procedimiento permite evaluar el riesgo cardiovascular mediante la medición de los niveles de triglicéridos en sangre.
La vía de la pentosa fosfato forma NADPH y ribosa fosfato en los tejidos especializados en síntesis reductivas como el hígado y tejido adiposo. Esta vía difiere de la glucólisis en que utiliza NADP en lugar de NAD y genera CO2 como producto. Además, no produce ATP. La ribosa fosfato sintetizada puede usarse para formar nucleótidos y ácidos nucleicos en casi todos los tejidos.
Este documento describe las características y clasificaciones de las enzimas. Las enzimas son catalizadores metabólicos que aceleran las reacciones químicas sin ser consumidas. Se clasifican según su función y ubicación. Algunas enzimas como la fosfatasa alcalina, TGO, GGT y amilasa se usan para diagnosticar ciertas enfermedades basadas en si sus niveles aumentan o disminuyen.
En esta presentación se encuentra un análisis de la actividad enzimática de la catalasa, en donde se hace uso de alimentos vegetales para ver como afectan la alteración de factores como el pH, la concentración de soluto, la temperatura y el tiempo de reacción de la actividad enzimática. Se evidencia una reacción oxido-reductasa.
Este documento describe varios métodos para la identificación bacteriana, incluyendo métodos basados en criterios morfológicos, tinción diferencial, pruebas bioquímicas, tipificación con fagos, pruebas serológicas y biología molecular. Se enfoca específicamente en describir las pruebas bioquímicas de citrato, ureasa y Voges-Proskauer, que son útiles para identificar enterobacterias.
Calibraciones, formas de calculo y materialesWilfredo Gochez
El proceso de la calibracion en Quimica Clinica es uno de los pasos mas criticos que define la calidad de los resultados en las pruebas.
Sin embargo en la literatura tradicional se encuentra muy poco material que explique de forma clara, precisa y facil como realizarlo de manera que los principiantes en esta materia comprendan de manera practica y teorica en que consiste la calibracion de las pruebas. Ademas la automatizacion de los analisis en quimica clinica han dotado a los laboratorios de modernos equipos de Quimica clinica, con caracteristicas modernas y de vanguardia, pero que aun necesitan de los criterios que el profesional en laboratorio clinic debera considerer para poder validar las calibraciones del equipo.
La vía de Entner-Doudoroff es una ruta metabólica alternativa a la glucolisis y la ruta de las pentosas fosfato que cataliza la degradación de la glucosa a piruvato usando enzimas diferentes. Algunas bacterias usan esta ruta en lugar de la glucolisis. La glucosa se convierte en dos moléculas de piruvato con la formación de ATP, NADH y NADPH.
Determinación cuantitativa de alanina aminotransferasa gpt (alt)Aida Aguilar
Este documento describe una práctica de laboratorio para determinar la cantidad de la enzima alanina aminotransferasa (ALT) en una muestra de suero. Explica que la ALT cataliza una reacción que produce piruvato, el cual se reduce a lactato, permitiendo medir la velocidad de la reacción fotométricamente. También detalla los pasos de la metodología, los reactivos utilizados e interpretación de los resultados.
Este documento describe las propiedades y características de las enzimas. Explica que las enzimas son proteínas que actúan como catalizadores biológicos, acelerando las reacciones químicas sin formar parte de los productos finales. También describe la estructura y función del sitio activo de las enzimas, así como los diferentes tipos de cofactores y coenzimas. Por último, explica conceptos clave de la cinética enzimática como la cinética de Michaelis-Menten y cómo se ven afectadas las velocidades de
Este documento describe los mecanismos de señalización celular, incluyendo los diferentes tipos de receptores celulares y cómo transmiten señales. Explica que existen receptores extracelulares y receptores intracelulares, y describe sus características y funciones principales. También explica conceptos clave como las proteínas G, la fosfolipasa C, la calmodulina y cómo estas moléculas participan en la transducción de señales dentro de la célula.
El documento describe la composición y uso del medio de cultivo TSI (Triple Azúcar Hierro Agar). El medio contiene glucosa, lactosa y sacarosa como fuentes de carbono fermentables, así como sales de hierro y tiosulfato de sodio que permiten detectar la producción de ácido sulfhídrico. El medio se usa para diferenciar bacterias según su capacidad de fermentar azúcares y producir ácido sulfhídrico y gas.
Este documento habla sobre tres enzimas: aldolasa, amilasa y aminotransferasas. Aldolasa cataliza la conversión de fructosa-1,6-P dihidroxiacetona-P + gliceraldehído 3-P. Existen tres isoenzimas de aldolasa. La determinación de la actividad de aldolasa se realiza en suero o plasma evitando la hemólisis. Amilasa hidroliza polisacáridos y existen dos isoenzimas, S y P. La determinación de amilasa se realiza en plasma. Las aminotransfer
El documento describe los biocatalizadores de naturaleza proteica conocidos como enzimas. Las enzimas son catalizadores orgánicos que aceleran las reacciones químicas sin consumirse en el proceso. Actúan a través de su sitio activo donde se une el sustrato y catalizan la reacción. Existen diferentes clases de enzimas según la reacción que catalizan como oxidorreductasas, transferasas e hidrolasas. Su actividad depende de factores como la concentración de sustrato, temperatura y pH
Tema 19 bacterias acido alcohol resistentesCat Lunac
Este documento describe las características de las micobacterias, en particular Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium leprae. M. tuberculosis causa la tuberculosis, que se transmite por vía aérea y puede afectar principalmente los pulmones. M. leprae causa la lepra, que se transmite por contacto directo y afecta principalmente la piel y los nervios periféricos. El documento cubre la morfología, cultivo, patogenicidad y diagnóstico de estas micobacterias.
Este documento describe diferentes tincciones ácido-resistentes utilizadas para identificar bacterias y protozoos. Explica los protocolos de las tincciones de Ziehl-Neelsen, Kinyoun y Auramina-Rodamina, incluyendo los reactivos, procedimientos y organismos que identifican. También resume las principales diferencias entre estas tincciones en términos de mordientes, decolorantes, contraste, necesidad de calor y facilidad de identificación de organismos.
Este documento presenta un informe de prácticas de laboratorio sobre la determinación de glucosa. Explica la importancia de la glucosa, el proceso de realizar la prueba, y los procedimientos de laboratorio para medir los niveles de glucosa en la sangre usando un método enzimático. El objetivo es capacitar a los estudiantes para que puedan conocer y determinar el valor de la glucosa en sangre a través de un análisis objetivo.
Este documento describe dos tipos de sustancias que interfieren con la cadena respiratoria: inhibidores, que detienen el transporte de electrones al bloquear componentes de la cadena, y desacopladores, que no detienen el transporte de electrones pero disipan el gradiente de protones. Se mencionan ejemplos específicos como el cianuro y la oligomicina como inhibidores, y el 2,4-dinitrofenol como desacoplador.
Este documento presenta información sobre la tinción de Gram y la tinción de Ziehl-Neelsen, dos técnicas utilizadas para identificar bacterias. Explica los pasos de cada tinción, incluyendo el uso de colorantes y solventes específicos, y cómo esto permite distinguir entre bacterias Gram-positivas y Gram-negativas en el caso de la tinción de Gram, y la identificación de micobacterias en la tinción de Ziehl-Neelsen.
El documento describe la membrana y el metabolismo del eritrocito. Los eritrocitos contienen hemoglobina y carecen de organelos, pero sintetizan ATP a través de la glucólisis. La membrana del eritrocito está compuesta por proteínas, lípidos y carbohidratos que controlan sus funciones de transporte y flexibilidad. La espectrina es la proteína principal del citoesqueleto y se conecta a la membrana a través de la anquirina y la proteína 4.1.
Este documento describe un método de extracción de ADN llamado salting-out. El método utiliza reactivos de baja toxicidad para lisar las células, lavar el pellet celular y precipitar el ADN genómico con alcohol isopropílico, permitiendo visualizar la hebra de ADN. El protocolo consta de 14 pasos que incluyen lisis celular, lavado del pellet, tratamiento con proteasa K y precipitación del ADN con sal y alcohol.
Este documento describe un protocolo para la extracción de ADN de sangre periférica utilizando el método CTAB. El protocolo implica la lisis celular y nuclear, precipitación de proteínas y ADN, y posterior purificación e hidratación del ADN aislado. El objetivo era extraer ADN de una muestra de sangre y comprender el proceso de aislamiento de ácidos nucleicos. Al aplicar el método, se observó la transformación del pellet y la obtención final de ADN en forma de grumos blanquecinos.
Este documento presenta un resumen de las enzimas. Comienza con definiciones generales sobre enzimas y catalizadores. Luego describe la clasificación y nomenclatura de las enzimas, así como su estructura y cofactores. Explica el mecanismo de acción de las enzimas, incluyendo su sitio activo, la disminución de la energía de activación y los grupos catalíticos. Finalmente, aborda conceptos de cinética enzimática como la velocidad de reacción, los efectos de la concentración de sustrato
Este documento describe un procedimiento para determinar la concentración de triglicéridos en suero humano. Se utilizan reactivos químicos y un espectrofotómetro para medir la absorbancia a 510 nm de muestras, un calibrador y un blanco. Los resultados se usan en una fórmula para calcular la concentración de triglicéridos, la cual se encontró dentro de los valores normales para el paciente. El procedimiento permite evaluar el riesgo cardiovascular mediante la medición de los niveles de triglicéridos en sangre.
La vía de la pentosa fosfato forma NADPH y ribosa fosfato en los tejidos especializados en síntesis reductivas como el hígado y tejido adiposo. Esta vía difiere de la glucólisis en que utiliza NADP en lugar de NAD y genera CO2 como producto. Además, no produce ATP. La ribosa fosfato sintetizada puede usarse para formar nucleótidos y ácidos nucleicos en casi todos los tejidos.
Este documento describe las características y clasificaciones de las enzimas. Las enzimas son catalizadores metabólicos que aceleran las reacciones químicas sin ser consumidas. Se clasifican según su función y ubicación. Algunas enzimas como la fosfatasa alcalina, TGO, GGT y amilasa se usan para diagnosticar ciertas enfermedades basadas en si sus niveles aumentan o disminuyen.
En esta presentación se encuentra un análisis de la actividad enzimática de la catalasa, en donde se hace uso de alimentos vegetales para ver como afectan la alteración de factores como el pH, la concentración de soluto, la temperatura y el tiempo de reacción de la actividad enzimática. Se evidencia una reacción oxido-reductasa.
Este documento describe varios métodos para la identificación bacteriana, incluyendo métodos basados en criterios morfológicos, tinción diferencial, pruebas bioquímicas, tipificación con fagos, pruebas serológicas y biología molecular. Se enfoca específicamente en describir las pruebas bioquímicas de citrato, ureasa y Voges-Proskauer, que son útiles para identificar enterobacterias.
Calibraciones, formas de calculo y materialesWilfredo Gochez
El proceso de la calibracion en Quimica Clinica es uno de los pasos mas criticos que define la calidad de los resultados en las pruebas.
Sin embargo en la literatura tradicional se encuentra muy poco material que explique de forma clara, precisa y facil como realizarlo de manera que los principiantes en esta materia comprendan de manera practica y teorica en que consiste la calibracion de las pruebas. Ademas la automatizacion de los analisis en quimica clinica han dotado a los laboratorios de modernos equipos de Quimica clinica, con caracteristicas modernas y de vanguardia, pero que aun necesitan de los criterios que el profesional en laboratorio clinic debera considerer para poder validar las calibraciones del equipo.
La vía de Entner-Doudoroff es una ruta metabólica alternativa a la glucolisis y la ruta de las pentosas fosfato que cataliza la degradación de la glucosa a piruvato usando enzimas diferentes. Algunas bacterias usan esta ruta en lugar de la glucolisis. La glucosa se convierte en dos moléculas de piruvato con la formación de ATP, NADH y NADPH.
Determinación cuantitativa de alanina aminotransferasa gpt (alt)Aida Aguilar
Este documento describe una práctica de laboratorio para determinar la cantidad de la enzima alanina aminotransferasa (ALT) en una muestra de suero. Explica que la ALT cataliza una reacción que produce piruvato, el cual se reduce a lactato, permitiendo medir la velocidad de la reacción fotométricamente. También detalla los pasos de la metodología, los reactivos utilizados e interpretación de los resultados.
Este documento describe las propiedades y características de las enzimas. Explica que las enzimas son proteínas que actúan como catalizadores biológicos, acelerando las reacciones químicas sin formar parte de los productos finales. También describe la estructura y función del sitio activo de las enzimas, así como los diferentes tipos de cofactores y coenzimas. Por último, explica conceptos clave de la cinética enzimática como la cinética de Michaelis-Menten y cómo se ven afectadas las velocidades de
Este documento describe los mecanismos de señalización celular, incluyendo los diferentes tipos de receptores celulares y cómo transmiten señales. Explica que existen receptores extracelulares y receptores intracelulares, y describe sus características y funciones principales. También explica conceptos clave como las proteínas G, la fosfolipasa C, la calmodulina y cómo estas moléculas participan en la transducción de señales dentro de la célula.
El documento describe la composición y uso del medio de cultivo TSI (Triple Azúcar Hierro Agar). El medio contiene glucosa, lactosa y sacarosa como fuentes de carbono fermentables, así como sales de hierro y tiosulfato de sodio que permiten detectar la producción de ácido sulfhídrico. El medio se usa para diferenciar bacterias según su capacidad de fermentar azúcares y producir ácido sulfhídrico y gas.
Este documento habla sobre tres enzimas: aldolasa, amilasa y aminotransferasas. Aldolasa cataliza la conversión de fructosa-1,6-P dihidroxiacetona-P + gliceraldehído 3-P. Existen tres isoenzimas de aldolasa. La determinación de la actividad de aldolasa se realiza en suero o plasma evitando la hemólisis. Amilasa hidroliza polisacáridos y existen dos isoenzimas, S y P. La determinación de amilasa se realiza en plasma. Las aminotransfer
El documento describe los biocatalizadores de naturaleza proteica conocidos como enzimas. Las enzimas son catalizadores orgánicos que aceleran las reacciones químicas sin consumirse en el proceso. Actúan a través de su sitio activo donde se une el sustrato y catalizan la reacción. Existen diferentes clases de enzimas según la reacción que catalizan como oxidorreductasas, transferasas e hidrolasas. Su actividad depende de factores como la concentración de sustrato, temperatura y pH
Este documento trata sobre enzimas oxidativas. Explica que las enzimas son proteínas que catalizan reacciones biológicas de forma específica y que se ven afectadas por factores como la temperatura y el pH. Se clasifican en hidrolíticas, oxidantes y reductoras. Luego se enfoca en las enzimas oxidoreductasas como la glucosa oxidasa, polifenoloxidasa, catalasa y peroxidasa, indicando que catalizan la oxidación o reducción de substratos. Finalmente describe la función protectora de la catalasa al descomp
El documento describe el uso del azul de metileno como tinción simple para teñir bacterias. El azul de metileno es un colorante básico que tiñe todas las bacterias por igual incrementando el contraste para poder verlas mejor al microscopio. Se utiliza siguiendo los pasos de extensión de la muestra, fijación, tinción y lavado antes de la observación.
La succinato deshidrogenasa es un complejo proteico ligado a la membrana interna mitocondrial que interviene en el ciclo de Krebs y en la cadena de transporte de electrones. Está compuesta de cuatro subunidades, dos hidrofílicas y dos hidrofóbicas, y contiene FAD unido covalentemente. Cataliza la reacción de oxidación del succinato a fumarato mediante la transferencia de electrones al ubiquinol.
La enzima succinato deshidrogenasa cataliza una reacción en el ciclo de Krebs y la cadena respiratoria mitocondrial. La catalasa descompone el peróxido de hidrógeno generado en el metabolismo celular en agua y oxígeno. Diferentes factores como el pH y la temperatura afectan la actividad enzimática al desnaturalizar las proteínas.
Este documento describe dos prácticas de laboratorio realizadas por estudiantes para observar la acción de enzimas sobre sustratos. En la primera práctica, observaron cómo la amilasa en la saliva descompone el almidón, mientras que la papaína en el ablandador de carne y enzimas en el hígado actúan sobre la gelatina. En la segunda práctica, notaron que las enzimas solo actúan sobre su sustrato específico. Los estudiantes concluyeron que las enzimas son cataliz
Este documento trata sobre los fundamentos de la fermentación alcohólica en la producción de vino. Explica que la fermentación alcohólica es llevada a cabo por levaduras como Saccharomyces cerevisiae y otras levaduras no-Saccharomyces presentes naturalmente en la uva. También cubre factores que influyen en la fermentación, como la temperatura y humedad, y el uso de levaduras secas activas comerciales. Finalmente, discute problemas fermentativos y el control de la fermentación para producir v
Este documento describe un experimento de laboratorio para estudiar la enzima succinato deshidrogenasa. Los objetivos son obtener un extracto de esta enzima a partir de tejido hepático y observar su actividad al convertir el succinato en fumarato usando azul de metileno como aceptor de electrones, así como estudiar el efecto inhibitorio del malonato sobre la enzima. El procedimiento incluye la preparación del extracto enzimático hepático y un ensayo para monitorear la reacción usando diferentes tubos de ensayo
Este documento describe un experimento para determinar la presencia de piruvato mediante la fermentación de levadura. Se explica que la producción de piruvato ocurre a través de una serie de reacciones enzimáticas durante la glucólisis. El procedimiento involucra agregar levadura y glucosa a tubos de ensayo y medir cambios de color usando 2,4-dinitrofenilhidracina para indicar la presencia de piruvato. El experimento busca observar la producción de piruvato y sacar conclusiones sobre los resultados de las m
La alanina aminotransferasa (ALT) es una enzima producida en los orgánulos de las células hepáticas
que cataliza la transferencia de grupos amino entre moléculas. Se libera al torrente sanguíneo y puede
utilizarse como marcador bioquímico para detectar enfermedades hepáticas. La ALT juega un papel
importante en el transporte de aminoácidos y en el metabolismo del hígado.
This document provides information about an upcoming exam on protein purification techniques and related topics. It outlines the skills and concepts students should have learned, including using pipettes, spectrophotometers, organizing protocols, and preparing reports. It notes an upcoming protein purification lab experiment and encourages students to pay attention to details and properly label all samples to avoid issues. Finally, it provides an overview of the protein purification strategy and techniques to be used, including ammonium sulfate precipitation, dialysis, and column chromatography.
Salting in , salting out and dialysis 233 bchAafaq Malik
Salting in and salting out can be used to selectively precipitate proteins. Salting in occurs at low salt concentrations and increases protein solubility by shielding charges. Salting out occurs at high salt concentrations, where ions compete with proteins for water, decreasing solubility and allowing proteins to aggregate and precipitate. Ammonium sulfate is commonly used because it is cheap, does not disturb protein structure, and is very soluble. Dialysis uses a semi-permeable membrane to remove salts from a solution, leaving the larger protein molecules behind.
Las deshidrogenasas catalizan reacciones de óxido-reducción al transferir hidrógenos de un sustrato a una molécula aceptora como NAD+, NADP+, FAD o FMN. Están involucradas en procesos metabólicos como la glucólisis, fermentación láctica, ciclo de Krebs y cadena de transporte de electrones, donde desempeñan un papel clave en la producción de energía para la célula.
El documento proporciona una introducción a la bioquímica como ciencia. Explica que estudia los componentes químicos y biomoléculas de los seres vivos, así como sus propiedades y funciones. Describe las características de la materia viva como su complejidad, orden y capacidad de replicación. Además, resume la estructura y organización celular de procariotas y eucariotas.
Este documento describe experimentos para medir la actividad de enzimas mitocondriales en tejidos de hígado y corazón. En el hígado, se midió la actividad de la citocromo oxidasa usando p-fenilendiamina. Se observó inhibición con cianuro de potasio. En el corazón, se midió la succínico deshidrogenasa usando azul de metileno y succinato de sodio. Diferentes concentraciones de extracto enzimático y solución salina afectaron el color. El malonato
Este documento describe la morfología y estructura de las bacterias. Explica que las bacterias son microorganismos unicelulares procariotas que carecen de núcleo y otros orgánulos celulares. Describe las principales estructuras bacterianas como la membrana celular, la pared celular, los ribosomas y el ADN cromosómico. También analiza la forma, tamaño y agrupaciones de las bacterias, así como técnicas para observarlas como la tinción de Gram.
El documento habla sobre los reglamentos de higiene y seguridad industrial. Explica que estos reglamentos establecen normas y responsabilidades para empleadores y empleados, identifican riesgos laborales como físicos y químicos, y describen deberes como usar equipo de protección personal y reportar accidentes. También menciona leyes y decretos relacionados con la organización y funcionamiento de comités de seguridad en el trabajo.
Este documento presenta información sobre cuatro pruebas enzimáticas: deshidrogenasa láctica, fosfatasa ácida prostática, gamma glutamil transferasa. Describe los tejidos donde se encuentran estas enzimas, los métodos para medir su actividad, valores de referencia, y condiciones que pueden afectar los resultados. Además, incluye instrucciones para la toma de muestras de cada prueba.
En esta práctica trabajamos con las enzimas presentes en el hígado de la vaca, en la papa y la cebolla, a estos se les extrajo el jugo para facilitar su uso en el laboratorio. Expusimos los extractos con los que íbamos a trabajar a soluciones con distintas temperaturas, a 80°C, 37°C, temperatura ambiente y 0°C. para poder ver e identificar los cambios que se realicen a distintas temperaturas en las enzimas. También se expuso el extracto de hígado a distintos PH tanto acido como básico y se reaccionó los distintos extractos con peróxido de hidrogeno. Con los anteriores procedimientos se pudo identificar la cinética enzimática de las diferentes enzimas presentes en los extractos utilizados.
El documento describe un experimento de laboratorio para caracterizar proteínas en la sangre. El objetivo era detectar enlaces peptídicos y analizar proteínas plasmáticas y componentes celulares después de agregar sulfato de amonio y ácido tricloroacético. Se extrajo sangre de un voluntario y se realizaron pruebas como Biuret, hemolisis, salting-out y desnaturalización con ácido tricloroacético. Los resultados mostraron la presencia de enlaces peptídicos, hemolisis de eritrocit
Este documento presenta información sobre una práctica de laboratorio realizada por estudiantes de
odontología sobre la actividad enzimática de la alfa-amilasa. La práctica midió la degradación del
almidón catalizada por la alfa-amilasa en la saliva mediante reacciones y cambios de color. Los
estudiantes analizaron cómo factores como la temperatura y el pH afectan la actividad enzimática.
El objetivo era demostrar experimentalmente la capacidad de la alfa-amilasa para degradar el
almidón en maltosa
El documento describe una práctica de laboratorio realizada por estudiantes de la Universidad Cooperativa de Colombia para estudiar factores que inhiben la actividad enzimática. En la práctica, intentaron preparar extractos de enzimas y coenzimas a partir de músculo de pollo para observar su interacción, pero no obtuvieron resultados debido a que el músculo probablemente no era fresco y los reactivos no fueron medidos con precisión.
Este documento describe un experimento para demostrar la actividad enzimática de la alfa-amilasa. La alfa-amilasa es una enzima que cataliza la degradación del almidón en maltosa y glucosa. El experimento involucra la incubación de una solución de almidón con y sin alfa-amilasa, luego la detección de productos o sustratos residuales usando indicadores químicos. El objetivo es mostrar cómo la presencia de la enzima alfa-amilasa causa cambios químicos que no ocurren en su ausencia, demo
Este documento describe una práctica de laboratorio sobre la demostración de la homeostasis calórica en la sangre. El resumen incluye mediciones de la concentración de cuerpos cetónicos y glucosa en la sangre y orina de estudiantes sometidos a diferentes dietas, así como una explicación del metabolismo y regulación de los cuerpos cetónicos durante periodos de ayuno prolongado.
En el siguiente archivo se desarrolla la práctica para la identificación de proteínas, en el cual se encuentran las técnicas llevadas a cabo y sus respectivos resultados.
Factores que afectan la actividad enzimática. 2013Hogar
Este documento describe un experimento que identifica factores que afectan la actividad enzimática de la catalasa. La catalasa es una enzima presente en las células que descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. El experimento muestra que la actividad de la catalasa se ve afectada por el pH, la temperatura y la presencia de vinagre o sal, lo que sugiere que estos factores pueden desnaturalizar la enzima.
Este documento presenta los objetivos, marco teórico y procedimiento de tres prácticas de laboratorio realizadas por estudiantes de la Licenciatura en Ciencias Naturales y Educación Ambiental de la Universidad de Córdoba. La primera práctica analiza la catalisis enzimática e inorgánica mediante la descomposición de peróxido de hidrógeno. La segunda cubre vitaminas y minerales. La tercera examina las propiedades físicas y químicas de los lípidos. El documento incluye anális
Este documento presenta dos experimentos sobre la determinación de la actividad enzimática de la glucosa oxidasa. El primer experimento mide la actividad enzimática a temperatura ambiente y calcula la cantidad de glucosa en una muestra de plasma. El segundo experimento estudia cómo la actividad enzimática cambia a diferentes temperaturas, determinando que la temperatura óptima para la glucosa oxidasa es entre 30-40°C.
Efectos generados por diferentes alcoholes en las membranas biológicasAlfredo Montes
Este documento describe un estudio que evaluó los efectos de diferentes alcoholes y concentraciones en membranas de células de remolacha. Se midió la absorción de las membranas tratadas con varios alcoholes como el etanol, ácido acético y cloroformo a diferentes concentraciones y tiempos de exposición usando un espectrofotómetro. Los resultados mostraron que concentraciones más altas y tiempos de exposición más largos causaron mayores niveles de absorción, lo que indica un mayor daño a las membranas.
Este documento describe la actividad enzimática y cómo se ve afectada por factores como la temperatura y el pH. Explica que las enzimas son proteínas que catalizan reacciones químicas y que su actividad puede ser alterada por la temperatura y el pH. A continuación, detalla tres experimentos para evidenciar la presencia de catalasa en tejidos, comprobar la acción de la amilasa e investigar el efecto de la temperatura en la actividad enzimática.
Este documento describe un experimento para demostrar la función de las enzimas y coenzimas utilizando músculo de pollo. Se preparan extractos de enzima láctica y coenzima del músculo, y se prueban sus efectos en reacciones que cambian el color. El extracto enzimático cataliza la oxidación del lactato produciendo un cambio de color en el azul de metileno debido a la acción de la coenzima y la enzima asociadas.
Este documento proporciona información sobre biomoléculas como glúcidos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos. Explica cómo determinar estas biomoléculas a través de métodos químicos y espectrofotométricos. También describe cómo identificar glúcidos específicos como la glucosa, así como lípidos, proteínas y ácidos nucleicos a través de ensayos de reactivos como Benedict, Selivanoff, Biuret y extracción de ADN respectivamente. Finalmente, resume cómo medir la glucosa en
Este documento describe un experimento para separar y demostrar la acción de la enzima láctica y la coenzima obtenidas de músculo de pollo. Se explica que la enzima fue extraída triturando el músculo, mientras que la coenzima se obtuvo calentando y triturando el músculo. Finalmente, se muestran los resultados del experimento donde se demuestra la acción de la enzima láctica al cambiar el color del azul de metileno.
Este documento describe una práctica de laboratorio sobre la actividad enzimática. Los estudiantes demostrarán la presencia de la enzima catalasa en tejidos y comprobarán cómo la temperatura afecta la actividad enzimática. También comprobarán la hidrólisis del almidón por la acción de la amilasa. El documento explica las características y factores que influyen en la actividad enzimática como parte del marco teórico de la práctica.
Este documento resume un experimento sobre el efecto de la ósmosis en trozos de papa colocados en soluciones de diferentes concentraciones de sal. Los resultados muestran que en una solución hipotónica la papa aumentó de tamaño debido a la turgencia, en una solución isotónica mantuvo su masa en equilibrio, y en una solución hipertónica disminuyó de tamaño debido a la liberación de agua en la plasmólisis, confirmando las predicciones sobre los efectos de cada tipo de solución.
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Este documento presenta los resultados de un experimento sobre las enzimas amilasa y catalasa. La amilasa salival degrada el almidón a diferentes temperaturas. Funciona óptimamente a 37°C, la temperatura corporal, mientras que a 0°C y 70°C es inactiva. La catalasa descompone el peróxido de hidrógeno. Los estudiantes analizan cómo factores como la temperatura y el pH afectan la actividad de estas enzimas.
Similar a Enzimología: Estudio de la Actividad de L-lactato: NAD+ Oxidos-Reductasa en el Higado del Animal de Experimetación. (20)
La enfermedad de Wilson es un trastorno genético autosómico recesivo que impide la eliminación adecuada del cobre del cuerpo, causando su acumulación en órganos como el hígado y el cerebro. Esto provoca síntomas hepáticos (hepatitis, cirrosis), neurológicos (temblores, rigidez muscular) y psiquiátricos (depresión, cambios de comportamiento). Se diagnostica mediante análisis de sangre, orina, biopsia hepática y pruebas genéticas, y se trata con medicamentos quelantes de cobre, zinc, una dieta baja en cobre y, en casos graves, trasplante de hígado.
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Enzimología: Estudio de la Actividad de L-lactato: NAD+ Oxidos-Reductasa en el Higado del Animal de Experimetación.
1. Universidad de Oriente - Núcleo Bolívar
Escuela de Ciencias de la Salud “Dr. Francisco Battistini Casalta”
Departamento de Ciencias Fisiológicas
Laboratorio de Bioquímica
Profesora:
Amintan Cardozo
Integrantes:
GRUPO DE LOS JUEVES A1
Ciudad Bolívar, Junio 2010
3. INTRODUCCIÓN
La enzimología es una disciplina bioquímica ajustada en el estudio y
caracterización de las enzimas, que son biomoléculas proteicas o ribonucleicas
que catalizan reacciones químicas en los sistemas biológicos. Estudia, por ello: la
implicación de las enzimas en el metabolismo; su estructura; su cinética; su
posible aplicación en la biotecnología enzimática; su variabilidad en la filogenia;
los adyuvantes enzimáticos, como los cofactores y las coenzimas; etc.
Ahora bien, en este caso se investigó con La lactato deshidrogenasa (LDH)
que es una enzima catalizadora que se encuentra en numerosos tejidos del
cuerpo formada por dos tipos de subunidades M y H, pero su presencia es mayor
en el corazón, hígado, riñones, músculos, glóbulos rojos, cerebro y pulmones. Las
subunidades M prevalece en el músculo esquelético y el hígado y la subunidades H
prevalecen en el corazón.
Pertenece a la categoría de las oxidorreductasas, dado que cataliza una
reacción redox, en la que el piruvato es reducido a lactato gracias a la oxidación
de NADH a NAD+. Dado que la enzima también puede catalizar la oxidación del
hidroxibutirato, ocasionalmente es conocida como Hidroxibutirato Deshidrogenasa
(HBD).
Participa en el metabolismo energético anaerobio, reduciendo el piruvato
(procedente de la glucólisis) para regenerar el NAD+, que en presencia de glucosa
es el sustrato limitante de la vía glucolítica.
Los vertebrados, en algunos tejidos o tipos celulares, obtienen la mayor parte
de su energía del metabolismo anaerobio (toda en el caso de eritrocitos dado que
carece de mitocondrias).
Por otra parte; los objetivos a estudiar en la experiencia son las siguientes:
Interpretar un diagrama de flujo
Extraer una enzima tisular
4. Extraer una coenzima tisular
Diferenciar método de extracción para una enzima y para una
coenzima.
Describir el concepto de isoenzima
Describir el mecanismo de acción del azul de metileno.
Explicar el papel del aceite en los tubos de reacción
Interpretar la actividad enzimática en distintos extractos tisulares
RESULTADOS
Para la elaboración de esta práctica de laboratorio se requirió los siguientes
materiales: 10 ml de una solución buffer salina pH 7,2 por gramo de tejido (en frío); 6 ml
de lactato de sodio al 1%; 4 ml de azul de metileno al 0,01%; 8 ml de aceite y un animal
de experimentación que en este caso fue un conejo.
A fin de la obtención del homogenado y enzima inactiva (apoenzima) se procedió
al sacrificio del animal mediante un golpazo muy contundente. Con el fin de eliminar la
LDH y lactato presentes en eritrocitos y plasma, se realiza un corte a nivel del paquete
vásculo-nervioso del cuello y se le deja desangrar; luego se procede con la vertiginosa y
rápida disección del hígado; con el objeto de obtener un parámetro de peso como
referencia se determina y registra el peso del tejido que fue de 20 gramos y se continúa
con el seguimiento de los siguientes pasos para la obtención y la separación de la LDH y
el NAD+
:
Se añadió 10 ml de buffer fosfato NaCl 0,9% por cada gramo de tejido; luego de
homogeneizar en frío durante 10 min se separan en 2 tubos de ensayo a cantidades
iguales la solución, una mitad se lleva a incubación a ebullición en baño de María por 10
min, luego de transcurrido el tiempo se enfría el dializado, se centrifuga a 3000 rpm
durante 10 min, por último se descarta el precipitado y la coenzima se obtiene del
sobrenadante; la otra mitad se llevo a centrifugar a 3000 rpm durante 10 min y del
sobrenadante se obtiene la enzima sin dializar.
Para la demostración de la actividad enzimática se procede a la preparación de
una serie de tubos como se indica a continuación:
Reactivo/ tubo 1 2 3 4 5 6 7
Enzima sin dializar 2ml ----- 2ml ---- 2ml ---- ----
Enzima dializada ---- 2ml ---- 2ml 2ml ----
Coenzima ---- 2ml 2ml ---- 2ml 2ml 2ml
Lactato de sodio 2ml 2ml 2ml 2ml ---- ---- 2ml
Azul de metileno 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml
Agua destilada 3ml 1ml 1ml 3ml 3ml 3ml 3ml
5. El tubo N° 1 corresponde al control de coenzima con enzima sin dializar, el N° 2 al
control de reacción con enzima dializada, N° 3 control de reacción de enzima sin dializar,
N° 4 control de coenzima con enzima dializada, N° 5 control de sustrato con enzima sin
dializar, N° 6 control de sustrato con enzima dializada y el N° 7 control de enzima.
Por último se añade 1 gotero de aceite a cada tobo para cubrir el medio
reaccionante y aislarlo del oxigeno del ambiente. Se conducen los tubos de ensayo a un
baño de María a 37 grados centígrados haciendo observaciones cada 5 min hasta la total
decoloración del azul de metileno (no más de 45 min).
Tabla de resultados de la experiencia:
Tiempo
(minutos)
Decoloración del azul de metileno (Hígado)
Tubo n°1 Tubo n° 2 Tubo n° 3 Tubo °4 Tubo n °5 Tubo n° 6 Tubo n° 7
0 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0%
5 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0%
10 0% 5% 0% 5% 0% 5% 0%
15 0% 10% 5% 15% 5% 15% 0%
20 0% 25% 10% 20% 10% 20% 0%
25 10% 30% 25% 30% 20% 30% 0%
30 15% 50% 30% 50% 38% 50% 0%
35 20% 55% 35% 50% 50% 50% 0%
40 27% 60% 45% 60% 70% 60% 0%
45 30% 60% 50% 60% 78% 60% 0%
6. DISCUSIÓN
Las enzimas son catalizadores biológicos específicos que catalizan las
reacciones que ocurren en un organismo, aumentando notablemente la velocidad
de las mismas en condiciones óptimas.
Existen enzimas que necesitan de uno o más componentes no proteicos
para realizar su actividad; estos son conocidos como cofactores y pueden ser
coenzimas o iones metálicos. Cuando la enzima está junto con su cofactor, está
activa y es llamada Holoenzima; cuando está separada de su cofactor es llamada
Apoenzima y es la parte proteica, inactiva.
La diálisis es un proceso en el cual una sustancia pasa a través de una
membrana porosa hacia un medio carente de ella misma por simple difusión. Las
coenzimas se pueden dializar ya que poseen un peso molecular bajo, lo que hace
posible que pasen por los poros de la membrana. Sin embargo, esto no le es
posible a la apoenzima, que al tener un peso molecular alto, no puede pasar por
los poros de la membrana de diálisis.
Al realizar la diálisis a una holoenzima, separamos la parte proteica de la
coenzima y restos de sustrato y tejido. Esto significa que una enzima dializada
requiere de coenzima para realizar su actividad.
La L-lactato: NAD+ óxido-reductasa es una enzima que requiere de una
coenzima para poder realizar su actividad. Esta utiliza NAD+ como coenzima y
realiza su actividad de oxido-reducción sobre el L-lactato. Su mecanismo de
reacción es el siguiente:
7. El Azul de Metileno es un colorante utilizado para medir la actividad
enzimática. Este actúa como aceptor de equivalentes reducidos, decolorándose, lo
que indica actividad de L-lactato NAD+ óxido-reductasa.
El tejido con el que trabajamos fue el tejido hepático. En el hígado la L-
lactato: NAD+ óxido-reductasa actúa oxidando el lactato a piruvato. El tejido
hepático es un tejido que contiene una alta cantidad de oxígeno, por lo cual tiene
una gran afinidad con el lactato.
En la experiencia de laboratorio, realizamos la experimentación con Hígado
de conejo. La práctica fue realizada con la enzima sin dializar y coenzima. En la
experimentación se consiguió:
Con enzima sin dializar (Hígado):
Tubo N° 1:
Se preparó con la enzima sin dializar del tejido hepático, lactato de sodio,
azul de metileno, agua y aceite. La reacción se colocó en un baño de María a
37ºC y empezó a presentar cambio de color a los 25 minutos alrededor de 10%, y
a los 45 minutos de calentarse tuvo un cambio de coloración final de un allegado
30% con respecto al tubo control (tubo Nº7).
Esto demuestra que la actividad enzimática de la Lactato deshidrogenasa
fue baja. Este cambio de coloración fue muy bajo al que debe alcanzar el tejido
hepático, ya que éste tejido tiene un alto contenido de oxígeno y por lo tanto, alta
afinidad con el lactato, y se oxida el lactato a piruvato. Esto pretende decir que
posiblemente sobrevino un error al distribuir el material enzimático o en los
preparativos de los tubos.
Tubo N° 3:
Se elaboró con la enzima sin dializar del tejido hepático, coenzima, lactato
de sodio, azul de metileno, agua y aceite. La reacción se colocó en un baño de
8. María a 37ºC y inició a presentar cambio de color a los 15 minutos
aproximadamente de 5%, y a los 45 minutos de calentarse tuvo un cambio de
color final de un aproximado de 50% con respecto al tubo control.
La actividad de la Lactato deshidrogenasa en este caso fue un poco mayor
en relación al tubo Nº 1, debido a que en esta ocasión se agregó la coenzima
(NAD+), que trabaja junto con la holoenzima en la oxidación del lactato, así que
hay mayor cantidad de equivalente reducidos, aunque sigue siendo un poco más
baja de la que correspondería presentar.
Tubo N° 5:
Se realizó con la enzima sin dializar del tejido hepático, coenzima, azul de
metileno, agua y aceite. La reacción se colocó en un baño de María a 37ºC y
comenzó a presentar cambio de color a los 15 minutos por ahí del 5%, y a los 45
minutos de calentarse tuvo un cambio de color final de un aproximado de 78% con
relación al tubo control.
En este tubo no se adicionó lactato de sodio como sustrato, pero la enzima
opera utilizando como sustrato el lactato presente en el tejido hepático, por lo que
hubo decoloración. Sin embargo, dado a que la cantidad de sustrato es menor en
este caso, el cambio de coloración debería ser menor que en el tubo anterior. Esto
hace sospechar un error en la preparación del material enzimático o en la
preparación de los tubos.
Con enzima dializada (Hígado).
Las reacciones con enzima dializada fueron ejecutadas por el equipo de
laboratorio. Con los datos obtenidos, tenemos:
Tubo N° 2:
Se plasmó con la enzima dializada del tejido hepático, coenzima, Lactato de
sodio, azul de metileno, agua y aceite. La reacción se colocó en un baño de María
a 37ºC y empezó a presentar cambio de color a los 10 minutos cerca del 5%, y a
los 45 minutos de calentarse tuvo un cambio de color final de un acercado del 60%
con respecto al tubo control.
La decoloración en este caso fue correcta, ya que hubo actividad
enzimática por la presencia de la enzima dializada (apoenzima) y su cofactor o
9. coenzima (NAD+). Estos hacen que haya equivalentes reducidos y por lo tanto,
decoloración del azul de metileno.
Tubo N° 4:
Se preparó con la enzima dializada del tejido hepático, Lactato de sodio,
azul de metileno, agua y aceite. La reacción se colocó en un baño de María a
37ºC y comenzó a presentar cambio de color a los 10 minutos aproximadamente
de 5%, y a los 45 minutos de calentarse tuvo un cambio de color final de un
aproximado de 60% con respecto al tubo control.
Dado a que en este tubo solo se agregó apoenzima y no se agregó el
cofactor, se supone que no debe haber actividad enzimática porque la apoenzima
es inactiva. Sin embargo, hubo decoloración del azul de metileno. Esto puede
deberse a un error en los preparativos del material enzimático.
Tubo N° 6:
Se realizó con la enzima dializada del tejido hepático, Coenzima, azul de
metileno, agua y aceite. La reacción se colocó en un baño de María a 37ºC y
emprendió a presentar cambio de color a los 10 minutos aproximadamente de
5%, y a los 45 minutos de calentarse tuvo un cambio de color final de un
aproximado de 60% con respecto al tubo control.
En este tubo no se agregó lactato de sodio, pero la apoenzima y la
coenzima actuaron sobre el lactato de sodio que hay presente en el tejido
hepático.
10. EJERCICIOS
1°- ¿Cómo explicaría usted el hecho que, el azul de metileno una vez decolorado
por la acción enzimática recupere nuevamente su color?
Rta: El azul de metileno es utilizado en la práctica como aceptor de
equivalentes reducidos y se decolora en presencia de los mismos. En la reacción
de oxidación de lactato a piruvato ocurre la reducción de la coenzima de NAD+ a
NADH+ produciendo la decoloración del azul de metileno. Es ineludible recordar
que la reacción de la LDH es reversible. Por lo tanto, ocurre la trasformación de
lactato a piruvato y de piruvato a lactato.
En el caso de la segunda reacción, ocurre la reducción de piruvato a lactato
y la oxidación de NADH+ a NAD+, por lo tanto no se presentan equivalentes
reducidos de la coenzima sino oxidados y por esta razón el azul de metileno
recobra su color original.
2°- ¿Qué resultados pueden tener concentraciones altas de oxígeno sobre la
proteína catalítica estudiada?
Rta: Las concentraciones altas de oxígeno pueden modificar la dirección de
la reacción catalizada por la LDH. En tejidos donde se hallan en altas
concentraciones de oxígeno (por ejemplo: tejido hepático) ocurre la oxidación de
lactato a piruvato, produciendo mayor cantidad de NADH+ como equivalente
reducido de la reacción.
3°- ¿Cuál sería el método ideal para separar el complejo enzima – coenzima?
Rta: La diálisis, debido a que la enzima por su elevado peso molecular no
atraviesa la membrana de diálisis, mientras que la coenzima por su pequeño peso
molecular atraviesa la membrana; logrando así separar la enzima de la coenzima,
conservando las propiedades de la enzima y por ende su actividad.
11. CONCLUSIÓN
1.- Cada célula y cada tejido tienen su actividad propia, lo que produce continuos
cambios en su estado bioquímico, en la base de la cual están las enzimas, que tienen el
poder de catalizar, facilitar, y agilizar determinados procesos sintéticos y analíticos.
2.- La coenzima puede considerarse como un segundo sustrato por dos razones: en
primer lugar, los cambios químicos en la coenzima compensan exactamente a los que
realizan en el sustrato. Por ejemplo, en las reacciones u oxidorreducción
(deshidrogenasa), una molécula de sustrato es oxidada y una molécula de coenzima es
reducida.
3.- El significado fisiológico se expresa en la capacidad del músculo que trabaja en
condiciones anaerobias para convertir el piruvato en lactato no residen en el piruvato ni en
el lactato. La reacción sirve solamente para oxidar la coenzima reducida NADH a NAD+
.
Sin NAD+
la glucólisis no puede continuar y la síntesis anaerobias de ATP tiene que cesar.
En condiciones anaerobias, la reducción del piruvato en lactato reoxida al NADH y permite
la síntesis de ATP.
4.- Las isoenzimas es otro tipo de regulación metabólica, de forma múltiple de una
determinada enzima, que se puede presentar en una sola especie de organismo e incluso
en una sola célula. La existencia de estas formas puede detectarse y separarse. La
lactato- deshidrogenasa por ser de esta clase, se presento en varias fracciones, difieren
en su composición de aminoácido y por lo tanto en los valores de sus pH isoeléctricos.
5.- La biosíntesis de los tipos de cadenas y por lo tanto, las cantidades relativas de las
isoenzimas del lactato-deshidrogenasa presentes en una determinada célula están bajo
regulación genética. Además, las proporciones relativas de los lactatos-deshidrogenasa
en un tejido pueden variar durante el desarrollo embrionario.
6.- Algunos estudios cinéticos del lactato-deshidrogenasa han demostrado que aunque
todos ellos catalizan la misma reacción, difieren significativamente en sus valores de Km
respecto a sus sustratos, particularmente respecto al piruvato, así como en los valores de
Vmáx cuando el sustrato es el piruvato.
7.- Después de haber cumplido la experiencia se logró obtener la reacción del lactato-
deshidrogenasa de los tejido usados (corazón, músculo e hígado), constado por la
decoloración del azul de metileno, ya que capta los equivalentes reducidos, en las
12. muestras de corazón e hígado, por la presencia de alta concentraciones de oxigeno,
además de la presencia de la enzima no dializada, coenzima y sustrato. Considerando
que en la muestra de músculo esquelético no hay cambios por bajas concentraciones de
oxígeno, que llevan a la no producción de equivalentes reducidos.
BIBLIOGRAFÍA
Lehninger, Albert L. Principios de Bioquímica.
Ediciones Omega, S.A. X 3era Edición. Año: 2000.
McKee, T., McKee, J. Bioquímica: La base molecular de la vida.
Editorial McGraw-Hill Interamericana. 3ra edición. Año: 2003.
Spinetti, M. Manual de Bioquímica. Editorial Científico-Medica.
3ra Edición. Año: 1959.