Este documento describe los procedimientos y resultados de pruebas bioquímicas realizadas para analizar la respiración en diferentes microorganismos. Se explican los tipos de respiración como la aerobia y la denitrificación. Las pruebas incluyeron la reducción del azul de metileno, la reducción de nitratos a nitritos, y las pruebas de oxidasa y catalasa. Los resultados mostraron qué microorganismos son positivos o negativos para cada prueba.

1. Respiración
INTEGRANTES
● Arellanes Avila Mariela
● Cevada Santiago Karen J.
● Luna Zagal Francisco Miguel
● Rodríguez Sánchez Irving
Equipo 8
Laboratorio 3 y 4
Grupo 3QM1
Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
LABORATORIO DE
MICROBIOLOGÍA GENERAL

2. Objetivo
Realizar algunas pruebas bioquímicas para poner de manifiesto las actividades
respiratorias que llevan a cabo los microorganismos.

4. TIPOS DE RESPIRACIÓN

6. Cadena Transportadora de Electrones en Bacterias
Las bacterias pueden usar múltiples cadenas de transporte de electrones, e incluso simultáneamente.
Las bacterias también generan un gradiente de protones, para ello utilizan al menos tres bombas de protones.
En la respiración aerobia el aceptor final de los electrones es el oxígeno que se reduce a agua.
Hay organismos capaces de respirar:
Nitrato, generando nitrógeno (bacterias denitrificantes)
Sulfato, generando sulfuro (bacterias sulforeductoras)
CO2, generando metano (bacterias metanogénicas)

8. Procedimiento
I. Reducción de azul de metileno
Incubar a 37°C
Anotar el tiempo que
tardan en decolorarse
los tubos.
Leche
Descremada
0.5 ml de Azul de
metileno

9. II.Reducción de nitratos a nitritos
B. subtilis E. coli
Incubar a 37°C / 24Hrs
B. subtilis E. coli
3 gotas
Գ-naftilamina
ácido sulfanílico

10. III. Pruebas de citocromo oxidasa y catalasa
B. subtilis E. coli
Incubar a 37°C por 24 Hrs
H2O2
Reactivo de oxidasa

11. PRUEBA DEL AZUL DE METILENO
El citocromo-oxidasa activa la oxidación del citocromo reducido por el oxígeno molecular, que a su vez actúa como un aceptor de
electrones en el periodo terminal del sistema de transferencia de electrones.
Los sustratos artificiales, como el azul de metileno, pueden sustituir a los aceptores de electrones naturales en cualquier lugar de la
cadena de transporte de electrones, donde actúan como reductores del sistema citocromo-c-citocromo-oxidasa.
Pruebas bioquímicas para la identificación de
bacterias de importancia clínica
By Jean F. MacFaddin

12. La reacción es catalizada por la enzima reductasa, que es una enzima respiratoria vinculada con la oxidación celular.
En el sistema de transporte de electrones, la transferencia de e- se produce a nivel de la flavoproteina (FAD).
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bacterias de importancia clínica
By Jean F. MacFaddin

13. RESULTADOS DE LA PRUEBA DE REDUCCIÓN DELAZUL DE METILENO
Tabla de resultados experimentales
de la prueba de azul de metileno del
laboratorio 4.
[ ] Cantidad de inóculo del
microorganismo en ml.
fig. 1 resultados del equipo 4 lab.4.
prueba de reducción de azul de
metileno
fig. 2 resultados del equipo 7
lab.4. prueba de reducción de
azul de metileno
fig. 3 resultados del equipo 5 lab.4.
prueba de reducción de azul de
metileno

14. Fig.1 laboratorio 3 equipo 4
reducción del azul de metileno
Fig. 2 laboratorio 3 equipo 7
reducción del azul de metileno
Fig.3 laboratorio 3 equipo 8
reducción del azul de
metileno
Tabla de resultados experimentales de la prueba
de reducción de azul de metileno del laboratorio 3
[ ] Cantidad de inóculo del microorganismo en ml.

15. *microorganismos positivo: enterococos (Streptococcus del grupo D)
*microorganismos negativos: especies de Streptococcus que por lo general no son enterococos

16. REDUCCIÓN DE NITRITOS A NITRATOS
La reducción del nitrato en nitrito tiene lugar generalmente en condiciones anaerobicas, el microorganismo obtiene su oxígeno del
nitrato.

17. REVELACIÓN DE LA PRUEBA
Pruebas bioquímicas para la identificación de
bacterias de importancia clínica
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Reacción positiva

18. Resultados de reducción de nitratos a nitritos

19. Staphylococcus aureus (-)
Proteus vulgaris (-)
Equipo 4
Laboratorio 4
Klebsiella pneumoniae (+)
Equipo 4
Laboratorio 3

20. Escherichia coli (+)
Equipo 8
Laboratorio 3
Bacillus subtilis (+)
Equipo 8
Laboratorio 3
Pseudomonas aeruginosa(-)
Shigella flexneri(-)
Equipo 2
Laboratorio 3

21. PRUEBA DE LA OXIDASA
La reacción de la oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidación del citocromo que es reducido por el
oxígeno molecular que produce agua o peróxido de hidrógeno según la especie bacteriana

22. PRUEBA DE OXIDASA
N,n,n,n-tetrametil-p-fenilendiamina
Oxígeno
Oxidasa

23. Resultados de Citocromo Oxidasa
Pruebas bioquímicas para la
identificación de bacterias de
importancia clínica
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24. Prueba de Oxidasa
Klebsiella
pneumoniae
(izquierda) y
Salmonella
typhi (derecha)
E5 L3
Staphylococcus
aureus (arriba) y
Proteus vulgaris
(abajo)
E7 L3

25. Bacillus subtilis (arriba) (+)
yEscherichia coli (abajo) (-)
E8 L3
Salmonella typhi (izquierda) (-)
Klebsiella pneumoniae (derecha) (+)

26. CATALASA
La catalasa es una hemoproteína es una hemoproteína; el grupo prostético está formado por cuatro átomos de hierro trivalente,
que retiene su estado oxidado durante la actividad enzimática.
El peróxido de hidrógeno se forma:
● como un producto terminal oxidativo de la descomposición aeróbica de los azúcares.
● proveniente de la dismutación del radical superóxido
La catalasa descompone el H2O2 u oxidar los sustratos secundarios.
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27. Resultado teórico:
Positivo para las 8
cepas

29. Equipo 7
Lab 4
K pneumoniae y
S typhi, ambos
positivos
Eq 4 L3
Equipo 3 lab 4 S. flexnery (+) P.aeruginosa (+) K.neumoniae (+) S.
typhi (+)

30. Conclusiones
● Comprendimos la importancia del proceso de respiración para la obtención de
energía en la célula.
● Analizamos las diferentes enzimas que utilizan los microorganismos como apoyo
en el proceso respiratorio y mediante pruebas bioquímicas determinamos qué
organismos son productores de estas.
● Notamos la importancia que tienen los diversos factores externos sobre los
resultados de estas pruebas al comparar nuestros resultados experimentales con
los esperados según la literatura.

31. BIBLIOGRAFÍA
Faddin M. Pruebas Bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia
clínica. Editorial médica Panamericana. Páginas 198. Páginas consultadas : 142-148,
39-44, 130-133, 154-159.
http://www.unac.edu.pe/documentos/organizacion/vri/cdcitra/Informes_Finales_Investi
gacion/Octubre_2011/IF_DECHECO%20EGUSQUIZA_FIPA/CAPITULO%20N%BA
%2004.pdf