Este documento describe la histopatología, que es el estudio de tejidos enfermos a través del microscopio. Se utilizan varios métodos como la microscopía óptica, electrónica e inmunohistoquímica. La histopatología permite el diagnóstico de tumores, inflamaciones y otras lesiones. Ofrece ventajas como un diagnóstico preciso y factores pronósticos. Se explican conceptos como biopsias, toma de muestras, preparación de cortes, coloraciones e interpretación de resultados.
Radioinmunoensayo, ELISA y Western BlotBryan Priego
A continuación, te proporciono información detallada sobre los tipos de ELISA, inmunoensayo y Western Blot, incluyendo los pasos a seguir, la técnica, el fundamento, los materiales, la historia y las aplicaciones. Espero que esta explicación te ayude a comprender mejor cómo se llevan a cabo estas técnicas y para qué se utilizan. Si tienes alguna duda, no dudes en preguntar, estaré encantado de ayudarte.
El ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica de ensayo inmunológico ampliamente utilizada para detectar y cuantificar la presencia de una sustancia específica, como un antígeno o un anticuerpo, en una muestra biológica. Existen diferentes tipos de ELISA, incluyendo el competitivo, directo, indirecto y sándwich.
En el ELISA competitivo, el antígeno de interés compite con un antígeno marcado previamente conocido por su unión a un anticuerpo. La cantidad de antígeno presente en la muestra se determina midiendo la cantidad de antígeno marcado que se une al anticuerpo.
En el ELISA directo, el antígeno de interés se une directamente a una superficie sólida (como un pozo de una placa de microtitulación) y se detecta utilizando un anticuerpo marcado que se une específicamente al antígeno.
En el ELISA indirecto, se utilizan dos anticuerpos: uno primario, que se une específicamente al antígeno, y otro secundario, marcado con una enzima, que se une al anticuerpo primario. La enzima proporciona una señal detectable para cuantificar la presencia del antígeno.
En el ELISA sándwich, se utilizan dos anticuerpos: uno de captura, que se une al antígeno, y otro de detección, que se une a otra región del antígeno. El antígeno se "sándwicha" entre los dos anticuerpos, lo que permite una alta sensibilidad en la detección.
El inmunoensayo es una técnica general que utiliza anticuerpos para detectar y cuantificar antígenos o anticuerpos específicos. El ELISA es un ejemplo de inmunoensayo, pero también existen otras técnicas, como el radioinmunoensayo (RIA), que utiliza isotopos radiactivos, y los inmunoensayos enzimáticos basados en enzimas para la detección.
El Western Blot, también conocido como inmunotransferencia, es una técnica utilizada para detectar proteínas específicas en una muestra. Consiste en separar las proteínas de la muestra mediante electroforesis en gel, transferirlas a una membrana y luego incubar la membrana con anticuerpos específicos para las proteínas de interés. Los anticuerpos marcados permiten la detección de las proteínas mediante reacciones enzimáticas o quimioluminiscencia.
Twitter.com/@bryanpriegop
Radioinmunoensayo, ELISA y Western BlotBryan Priego
A continuación, te proporciono información detallada sobre los tipos de ELISA, inmunoensayo y Western Blot, incluyendo los pasos a seguir, la técnica, el fundamento, los materiales, la historia y las aplicaciones. Espero que esta explicación te ayude a comprender mejor cómo se llevan a cabo estas técnicas y para qué se utilizan. Si tienes alguna duda, no dudes en preguntar, estaré encantado de ayudarte.
El ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica de ensayo inmunológico ampliamente utilizada para detectar y cuantificar la presencia de una sustancia específica, como un antígeno o un anticuerpo, en una muestra biológica. Existen diferentes tipos de ELISA, incluyendo el competitivo, directo, indirecto y sándwich.
En el ELISA competitivo, el antígeno de interés compite con un antígeno marcado previamente conocido por su unión a un anticuerpo. La cantidad de antígeno presente en la muestra se determina midiendo la cantidad de antígeno marcado que se une al anticuerpo.
En el ELISA directo, el antígeno de interés se une directamente a una superficie sólida (como un pozo de una placa de microtitulación) y se detecta utilizando un anticuerpo marcado que se une específicamente al antígeno.
En el ELISA indirecto, se utilizan dos anticuerpos: uno primario, que se une específicamente al antígeno, y otro secundario, marcado con una enzima, que se une al anticuerpo primario. La enzima proporciona una señal detectable para cuantificar la presencia del antígeno.
En el ELISA sándwich, se utilizan dos anticuerpos: uno de captura, que se une al antígeno, y otro de detección, que se une a otra región del antígeno. El antígeno se "sándwicha" entre los dos anticuerpos, lo que permite una alta sensibilidad en la detección.
El inmunoensayo es una técnica general que utiliza anticuerpos para detectar y cuantificar antígenos o anticuerpos específicos. El ELISA es un ejemplo de inmunoensayo, pero también existen otras técnicas, como el radioinmunoensayo (RIA), que utiliza isotopos radiactivos, y los inmunoensayos enzimáticos basados en enzimas para la detección.
El Western Blot, también conocido como inmunotransferencia, es una técnica utilizada para detectar proteínas específicas en una muestra. Consiste en separar las proteínas de la muestra mediante electroforesis en gel, transferirlas a una membrana y luego incubar la membrana con anticuerpos específicos para las proteínas de interés. Los anticuerpos marcados permiten la detección de las proteínas mediante reacciones enzimáticas o quimioluminiscencia.
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Se presenta el caso de una neoplasia abdominal recidivante, en un canino de raza Rotteirler de 12 años de edad, que en una primera cirugía (nefrectomia) fue considerado como una hidronefrosis y 6 meses después vuelve a ser operado realizadose el análisis histopatológico el cual revela que se trata de un FIBROSARCOMA.
3. La Histopatología
• Es el estudio de los tejidos
enfermos a través del uso del
microscopio.
• Métodos usados en
Histopatología:
– Microscopía óptica de luz
– Microscopía electrónica
– Histo e Inmunohistoquímica
– Biología Molecular
4. Aplicaciones del Estudio Histopatológico
Es la técnica Gold-standard para el
diagnóstico de tumores sin
importar el origen tisular
Permite caracterizar un gran
número de lesiones tisulares:
Inflamaciones, infecciones,
alergias, trastornos hormonales,
respuestas adaptativas,
reparativas, degenerativas,
Caracteriza o aproxima al
diagnóstico de múltiples agentes
infecciosos: ácaros, hongos,
bacterias, parásitos
Permite el diagnóstico de algunas
infecciones víricas y en otros
casos sugiere compatibilidad
5. Ventajas
• Diagnóstico sensible y específico Para el
diagnóstico de diversas enfermedades
• Permite valorar la arquitectura y
distribución de la lesión – Cáncer
• Establece factores de pronóstico
• Programas de manejo, prevención y
control
• Realizar seguimiento a enfermedades
• Apoyo a la investigación
29. SELECCIÓN DE LA MUESTRA:
NECROPSIA:
• Tomar muestra de los tejidos u órganos que presenten lesiones.
• Si no se encuentran lesiones tomar muestra de los tejidos u
órganos blanco de los síntomas.
• Si no se encuentran lesiones ni síntomas tomar muestra de órganos
representativos de cada uno de los sistemas orgánicos.
33. TOMA DE LA MUESTRA
Utilizar instrumental bien afilado.
Muestra de no más de 5 mm de espesor. Excepto muestras de
Encéfalo, Medula espinal y ojo.
Neoplasia Señalar bordes
36. Descripción de las lesiones
• Observación y experiencia
• Terminología:
– Localización
– Número y extensión de la lesión
– Tamaño y peso
– Color
– Forma
– Consistencia
37.
38. TOMA DE MUESTRA
• Fijar la muestra rápidamente en formol bufferado
• No frotar ni limpiar la piel antes de muestrearla.
• Las muestras de hueso deben incluir desde corteza hasta la
cavidad medular.
• La muestra no debe congelarse, ni refrigerarse por tiempo
prolongado, ni fijarla en alcohol.
40. ENVÍO DE LA MUESTRA
• Debe enviarse en frasco plástico de boca ancha.
• Por cada volumen de tejido se deben adicionar 10 volúmenes
de fijador.
• Se debe identificar adecuadamente la muestra
• Si se envían varias muestras de un mismo tejido se debe
identificar cada una de ellas.
• La muestra debe venir acompañada de una buena historia y
descripción de la lesión
62. Qué se evalúa en una neoplasia?
CRITERIOS DE DIFERENCIACIÓN:
1. Diferenciación y anaplasia.
2. Tasa de crecimiento.
3. Invasión local.
4. Metástasis.
63. DIFERENCIACIÓN Y ANAPLASIA
Diferenciación: Evalúa la semejanza a las células normales del
tejido, comparables tanto morfológica como funcionalmente.
Anaplasia: falta de diferenciación.
65. CRITERIOS DE MALIGNIDAD: Diferenciación y anaplasia
1. Pleomorfismo celular.
2. Hipercromacia nuclear.
3. Cromatina nuclear en grumos gruesos.
4. Alteración relación núcleo/citoplasma.
5. Nucléolos prominentes.
6. Abundantes mitosis atípicas.
7. Células gigantes tumorales.
8. Polaridad de crecimiento alterada.
66.
67. TASA DE CRECIMIENTO
Mayor en los tumores Malignos.
Algunos tumores benignos pueden progresar a tumores
malignos
En general guarda relación con el nivel de diferenciación.
68. INVASION LOCAL
Tumores Benignos: masas cohesivas, borde expansivo,
localizadas, no invaden.
Habitualmente con cápsula fibrosa. Son móviles, fácilmente
enucleables.
Tumores Malignos: crecimiento infiltrativo con invasión y
destrucción tisular.
74. INMUNOHISTOQUÍMICA
Técnicas de inmunotinción que permiten demostrar una variedad
de antígenos presentes en las células o tejidos utilizando
anticuerpos marcados - sustancia que absorbe o emite luz o
produce coloración.
Estas técnicas se basan en la capacidad de los anticuerpos de
unirse específicamente a los correspondientes antígenos.
Esta reacción es visible sólo si el anticuerpo está marcado.
75. INMUNOHISTOQUÍMICA
Las técnicas inmunohistoquímicas permiten:
Precisar tipos histológicos de tumores
Detectar secreción de sustancias.. Hormonas
Detectar antígenos de superficie en linfocitos
Se requiere material fresco o congelado
76. MARCADORES
INMUNOHISTOQUIMICOS
Anticuerpo Células/antígenos detectados
CD1a célula de Langerhans
CD4 linfocito T de auxilio
CD8 linfocito T citotóxico
CD30 célula de Reed-Sternberg
CD45 leucocitos
CD68 macrófagos
S100 células de Schwann
HMB-45 melanocitos
AE1 citoqueratinas de bajo peso molecular
AE3 citoqueratinas de alto peso molecular
DESMINA células musculares
GFAP glía
CEA antígeno carcino-embrionario
AFP alfa-fetoproteína
REN receptores nucleares de estrógenos
VIM sarcomas