El documento presenta información sobre los procesos de fijación, inclusión en parafina, deshidratación, aclaramiento e impregnación de muestras de tejido para su posterior análisis microscópico. Se explican los pasos del proceso, los químicos utilizados como la formalina y la hematoxilina-eosina, y se discuten otros métodos de tinción para revelar diferentes componentes celulares.
3. Los cortes que son teñidos con
Hematoxilina-Eosina son los que
encontramos con mayor
frecuencia.
Tinción con Hematoxilina-Eosina
con fijación en Formalina
02
Hematoxilina
Eosina
10. Inclusión en la parafina
Inclusión en la parafina
Para examinar una muestra, se requiere de su infiltración con un
medio de inclusión que permite realizar cortes muy finos, en general
en el rango 5- 15 um. (1 micrón {µm} equivale a 1/1000 milimetros
{mm}; tabla 1-1).
¿Qué es un que es un micrón?
Es la unidad de longitud
equivalente a una millonésima
parte de un metro.
11. Deshidratación
Deshidratación
Este proceso se lleva a cabo habitualmente sumergiendo las
muestras en una serie de soluciones de etanol (alcohol) de
concentración creciente, este se incrementa al 100%, hasta que se
alcanza alcohol para remover el agua.
12. Aclaramiento
Aclaramiento
Por lo tanto, tenemos que utilizar un disolvente intermedio que sea
totalmente miscible con etanol y cera de parafina. Este disolvente extrae el
etanol (alcohol) antes de la infiltración de la muestra con la parafina fundida.
Xileno: Se trata de líquidos
incoloros e inflamables con un
característico olor parecido al
tolueno.
-Solventes orgánicos o Agentes
aclarantes:
Tolueno: El tolueno es un hidrocarburo
aromático; a menudo reemplaza al
benceno venenoso como disolvente.
14. Cuando la parafina fundida se ha enfriado y endurecido, se corta
para forma un bloque de tamaño adecuado.
Micrótomo:
15. La muestra se tiñe para
permitir su observación.
La muestra se tiñe para
permitir su observación.
Como los cortes en parafina son incoloros, la muestra
todavía no está lista para su observación bajo el
microscopio óptico. Para teñir los cortes histológicos la
parafina debe extraerse y disolverse en xileno o tolueno y
los tejidos deben rehidratarse mediante una serie de
disoluciones de alcohol en concentración decreciente.
16.
17. Esta microfotografía
solo revela la tinción
con hematoxilina.
En cambio esta
microfotografía
revela la tinción con
eosina.
En esta micrografía
se aprecia el efecto
de la tinción
combinada.
Conjunto de muestras del páncreas.
Conjunto de muestras del páncreas.
18. Si bien los cortes teñidos con H&E de muestras fijadas en
formalina resultan practicos, ya que muestran
adecuadamente las caracteristicas estructurales generales,
no permiten dilucidar la composicion quimica de los
elementos celulares.
Sin embargo, muchos componentes se pierden durante la
preparacion de la muestra.
OTROS FIJADORES
OTROS FIJADORES
LA FORMALINA NO PRESENTA TODOS LOS COMPONENTES DE LAS CELULAS Y LOS TEJIDOS
19. OTROS FIJADORES
OTROS FIJADORES
Para conservar estos componentes y estructuras, se deben utilizar otras tecnicas de
fijacion.
En general, estas tecnicas se fundamentan en un conocimiento solido de la quimica
implicada. Por ejemplo, los alcoholes y solventes organicos que se usan en preparados de
rutina diluyen los lipidos neutros.
Deben emplearse cortes por
congelacion de tejido fijado en
formalina y colorantes que se
disuelvan en grasa.
Para conservar las estructuras de las
membranas, se utilizan fijadores
especiales con METALES PESADOS,
como PERMANGANATO y OSMIO que
se unen a los fosfolipidos.
20. TIPOS DE FIJADORES
TIPOS DE FIJADORES
SE CLASIFICAN EN DOS GRANDES GRUPOS:
OXIDANTES: REDUCTORES:
-Tetraóxido de osmio (ácido
ósmico)
-Bicromato de potasio
-Acido crómico
-Bicloruro de mercurio
-Acido pícrico
-Acido acético.
-Formaldehído
-Glutaraldehído
-Alcohol etílico
-Alcohol metílico.
21. CONDICIONES DE UN BUEN FIJADOR
CONDICIONES DE UN BUEN FIJADOR
UNA SUSTANCIA FIJADORA PARA QUE EJERZA DE MANERA EFICIENTE Y ADECUADA SUS
FUNCIONES DEBE POSEER LAS SIGUIENTES CONDICIONES
MATAR INMEDIATAMENTE A LAS CELULAS, IMPIDIENDO LA APARICION DE
LOS PROCESOS AUTOLITICOS. PARA TAL FIJADOR DEBE POSEER:
PRODUCIR CIERTA DUREZA A LOS TEJIDOS SIN QUE PROVOQUE EXCESIVA
RETRACCION O HACERLOS QUEBRADIZOS Y FRIABLES.
DEBE SER DE FACIL MANIPULACION.
NO DEBE DISOLVER COMPONENTES CELULARES.
QUE SEA FACIL DE CONSEGUIR Y QUE SEA BARATO.
-UN BUEN PODER DE PENETRACION, QUE EN CONTADOS INSTANTES SE
INTRODUZCA CON RAPIDEZ EN EL ESPESOR DE LA MUESTRA.
-UN BUEN PODER DE DIFUSION, QUE NO FIJE SOLO LA PORCION SUPERFICIAL
DE LA MUESTRA SINOO QUE ALCANCE LAS PORCIONES MAS PROFUNDAS DE
LA MISMA.
22. Otras tecnicas de
tinción
A pesar de la ventajas de tincion con hematoxilina y la eosina el
procedimiento no permite ver de forma adecuada en los cortes
histologicos,como la elastina, las fibras reticulares ,las membrana basales y
los lipidos.
23. ORCEÍNA
La orceína pertenece al grupo de los colorantes de oxazina de color
morado y se recomienda especialmente para la tinción de:
1.-Fibras elásticas.
2.- Cromatina del sexo
3.-Tinción nuclear
4.-Tinción de inclusiones en el hígado, especialmente de antígenos de la
hepatitis B.
24. Fucsina-resorcina
La tinción de fucsina - resorcina es una tinción regresiva para el
material elastico. Para la tinción nu- clear en cortes de tejido se podrá
utilizar una solución de rojo nuclear sólido - sulfato de aluminio al 0,1
% si, aparte de las fibras elásticas, también se desea teñir en tonos
rojizos los núcleos y el fondo.
25. Impregnacion argentica
Tiñe las fibras reticulares y las membranas basales.Este tipo de tinción es
importante especialmente para revelar la ubicación de proteínas (por
ejemplo colágeno tipo III) y ADN. Es utilizada para demostrar ambos tipos
de sustancia tanto dentro como fuera de las células.
