Este documento describe los métodos cromatográficos, que son técnicas para separar los componentes de una mezcla utilizando dos fases no miscibles. Estas técnicas incluyen cromatografía de papel, capa fina, gas y líquidos. La separación se basa en las diferentes interacciones entre los componentes de la mezcla y las fases estacionaria y móvil, resultando en la elución a diferentes velocidades.

1. METODOS
CROMATOGRÁFICOS
Igor Ivan Villalta Sorto
investigacionquimica@usam.edu.sv

2. METODOS CROMATOGRÁFICOS
• Son métodos para la
separación de
sustancias en mezclas
y para la
identificación o la
cuantificación de los
diferentes
componentes.
• La separación se da a
base de procesos de
distribución y
absorción.
• En los métodos
cromatográficos se
utilizan dos fases no
miscibles una con
otra.
• Una de las fases es
estacionaria
(absorbente) y la otra
móvil.
• Por medio de la fase
móvil se transporta la
mezcla de sustancias
a separar.

3. CROMATOGRAFÍA
 De capa fina.
 Estas se comparan
con los estándares que
se encuentran en las
farmacopeas

4. CROMATOGRAFIA
• La fase estacionaria
puede ser sólida o
líquida
• La fase móvil puede
ser líquida (eluente) o
gaseosa (gas portador)
• LAS
POSIBILIDADES
• Gas-líquido
• Gas-sólido
• Líquido-líquido
• Líquido-sólido

5. METODOS DE CROMATOGRAFÍA
•CROMATOGRAFÍA DE PAPEL
•CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
• CROMATOGRAFÍA DE GAS
•CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS (EN COLUMNA; HPLC)

6. PRINCIPIOS FÍSICO-QUÍMICOS
 DISTRIBUCIÓN
ENTRE DOS FASES
 Se basa en el hecho
que cada sustancia
muestra una
distribución
característica entre
dos fases por su
afinidad (polaridad),
lo que se expresa en el
coeficiente de
distribución C
 COEFICIENTE DE
DISTRIBUCIÓN
 C = concentración de
sustancia fase 1 entre
 Concentración de
sustancia fase 2
 C, depende de la
temperatura.

7. EJEMPLOS
• CROMATOGRAFÍA
DE PAPEL
• Fase estacionaria:
capa de agua que se
forma por la humedad
ambiental en la
superficie de la
celulosa de papel
• Fase móvil: mezcla de
solventes
• CROMATOGRAFÍA
DE GAS
• Fase estacionaria:
líquido
• Fase móvil: gas

10. TLC, revelada con la irradiación de luz UV 254 nm
TLC, revelada con la irradiación de luz UV 365 nm
Reunión de la columna cromatográfica de las raíces de Ambrosia cumanensis

11. Macerado de las raíces de
Ambosia cumanensis
(EtOH, macerado de 20 días)
TLC, raíces de Ambrosia cumanensis
(Revelador de vainilla en ácido sulfúrico)
Cámara reveladora Esprayador
Reunión de la columna cromatográfica de las raíces de Ambrosia cumanensis

13. SOLVENTES FRECUENTEMENTE UTILIZADOS EN CCF
SOLVENTES NO POLARES:
- n-hexano
- CCl4
- Tolueno
- Éter de petróleo
- n-heptano
- Benceno (extremadamente tóxico)
SOLVENTES DE MEDIANA POLARIDAD:
- CH2Cl2
- CHCl3
- Éter etílico
SOLVENTES POLARES:
- Acetato de etilo
- Acetona
- Dioxano
- Isopropanol
- EtOH
- MeOH
- H2O
La fase móvil puede estar formada por
un único solvente, por mezcla de dos
(binaria) o tres (terciaria).
FASE MÓVIL DE “BATALLA”
n-hex:AcOEt (1:1)
no polar:polar

14. Cromatografía en capa fina (CCF)Cromatografía en capa fina (CCF)
- Fase estacionaria: celulosa, alumina, celita, poliamida, gel de sílice, etc.
- Fase móvil: depende de las características de la muestra, disolventes de distintas
polaridades.
- Detección con luz UV o rociando con un reactivo.
Cromatografía de Adsorción
- Se suele usar para el seguimiento de reacciones, para determinar
número de componentes de una mezcla, pureza de un producto y
seguimiento de columnas cromatográficas.

15. La mezcla a separar se deposita sobre la
fase estacionario y la móvil atraviesa el
sistema desplazando a los componentes
de la mezcla a distinta velocidad,
dependiendo de la magnitud de sus
interacciones relativas con ambas fases.
La repetición sucesiva de las operaciones
elementales de retención y
desplazamiento a lo largo del sistema
cromatográfico da lugar a la separación
de la mezcla original.
(Figura 10.2).
El fenómeno de migración de los componentes de una mezcla
a lo largo de la fase estacionaria, impulsados por la móvil,
recibe el nombre de elución (Figura 10.2).

16. Método de Separación: Técnicas cromatográficas
La cromatrografía es una técnica que permite la separación de los
componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos
contrapuestos:
a) Retención: efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por
una fase estacionaria, que puede ser un sólido o un líquido ancla-
do a un soporte solidó.
b) Desplazamiento: efecto ejercido sobre los componentes de la
mezcla por una fase móvil, que puede ser un líquido o un gas.

17. PASOS PARA UNA CROMATOGRAFÍA DE
CAPA FINA

18. PASOS PARA UNA CROMATOGRAFÍA
DE CAPA FINA

19. CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

20. ABSORCIÓN
• DEFINICIÓN
• Acumulación de una
sustancia en la superficie
de otra a base de
interacciones específicas
entre la superficie polar
del absorbente y grupos
polares de la sustancia
absorbida.
• En menor concentración la
sustancia puede correr
más tiempo con la fase
móvil, para comparar
diferentes muestras hay
que usar concentraciones
parecidas.
• LA CAPACIDAD DE
ABSORCIÓN DEPENDE
DE:
• Temperatura (Tº mayor-
menor absorción)
• Superficie del absorbente
(superficie más grande-
más absorción), se
prefieren polvos finos como
absorbentes.
• La cantidad de sustancia
en la fase móvil.

21. FACTOR DE RETENCIÓN RF
 Rf = distancia entre la
línea de partida y la
posición de la
sustancia, distancia
entre la línea de
partida y el frente del
solvente
 Es un valor relativo
que proporciona
información acerca de
la posición de las
diferentes sustancias,
lo que ayuda a
identificarlas.

22. FACTOR DE RETENCIÓN RF

23. REVELACIÓN
• Definiciones
• Se refiere al proceso de
separación de las
sustancias o a la
visualización de las
sustancias después de la
separación
• Algunas sustancias
emiten fluorescencia en
luz UV de 256 o 366 nm,
otras desactivan la
fluorescencia de placas
de silicagel que
contienen sustancias
fluorescentes.
• Otras sustancias se
visualizan por medio de
calor o de reacciones
químicas, se disperga un
reactivo en la placa que
forma un compuesto de
color con la sustancia.