Citotoxicidad articulo cientifico

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JoelErazo Mendoza, JorgeCañarteAlcívar; CITOTOXICIDAD
Catedra de XXXXXXXXXXXX, Escuela de XXXXXXXXXXX, Facultad Ciencias de la Salud. Universidad Técnica de Manabí.
CITOTOXICIDAD
Joel Erazo Mendoza1
, Jorge Cañarte Alcívar2-3-4
1Estudiante de la Escuela de laboratorioclinico. FacultadCiencias de la Salud. UniversidadTécnica de Manabí, Portoviejo –
Manabí – Ecuador
2Docente Investigador. Facultad Ciencias de la Salud. Universidad Técnica de Manabí. Portoviejo – Manabí – Ecuador
3Medico especialista en Inmunología Clínica, StemMedic, Manta – Manabí – Ecuador.
4Director de Docencia e Investigación, Instituto Ecuatoriano de Enfermedades Digestiva IECED, Portoviejo – Manabí –
Ecuador
Resumen. –
Es un mecanismo efector de determinadas
poblaciones celulares especializadas del sistema
inmunitario, consiste en la capacidad para
interaccionar con otras células y destruirlas.
Cualquier tipo celular normal o patológico, puede
ser potencialmente susceptible a las células
citotóxicas. Diferentes tipos de leucocitos
presentan cierto grado de actividad citotóxica en
ensayos in vitro, pero se consideran como
prototipo de las células especializadas a una
subpoblación de Linfocitos T (Tc, CTL) y a las
células Natural Killer (NK). La función de
citotoxicidad exige de una actividad metabolica
activa de la celula a temperatura fisiologica, no
implica la sintesis de proteinas, pero si requiere de
la presencia de catios divalentes como la
integridad del citoesqueleto. La citotoxicidad es la
cualidad de algunas células para ser tóxicas frente
a otras que están alteradas. La citotoxicidad
constituye uno de los mecanismos efectores de
ciertas poblaciones celulares especializadas del
sistema inmunitario, consistente en la capacidad
para interaccionar con otras células y destruirlas.
Tipo de reacción inmunitaria por la que una célula
o microbio determinados se recubren con
anticuerpos y son destruidos por ciertos tipos de
glóbulos blancos. Los glóbulos blancos se
adhieren a los anticuerpos y liberan
sustancias que matan esas células o microbios.
Daño celular provocado por la acción de
anticuerpos específicos y complemento o por
células citotóxicas. Constituye una de las más
importantes respuestas efectoras inmunitarias para
la defensa contra los agentes infecciosos.
Citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos:
es un mecanismo indirecto por el que células
matadoras como NK, eosinófilos, etc.,
interaccionan con el antígeno por medio de
puentes de anticuerpos.
Asbtract.-
It is an effector mechanism of certain
specialized cell populations of the immune system,
which consists of the ability to interact with and
destroy other cells. Any normal or pathological
cell type can be potentially susceptible to cytotoxic
cells. Different types of leukocytes show a certain
degree of cytotoxic activity in in vitro assays, but
a subpopulation of T lymphocytes (Tc, CTL) and
Natural Killer (NK) cells are considered
prototypes of specialized cells. The cytotoxicity
function requires an active metabolic activity of
the cell at physiological temperature, it does not
involve protein synthesis, but it does require the

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presence of divalent cathos such as the integrity of
the cytoskeleton. Cytotoxicity is the quality of
some cells to be toxic compared to others that are
altered. Cytotoxicity constitutes one of the effector
mechanisms of certain specialized cell populations
of the immune system, consisting of the ability to
interact with and destroy other cells. A type of
immune reaction in which a certain cell or microbe
is coated with antibodies and destroyed by certain
types of white blood cells. White blood cells stick
to antibodies and release substances that kill those
cells or microbes. Cell damage caused by the
action of specific antibodies and complement or by
cytotoxic cells. It constitutes one of the most
important immune effector responses for defense
against infectious agents. Antibody-dependent
cellular cytotoxicity: it is an indirect mechanism
by which killer cells such as NK, eosinophils, etc.,
interact with the antigen through antibody bridges.
Palabras claves. –
Patologico, Sintesis, citotoxicidad,
citoesqueleto, eosinofilos.
Introducción.-
Definición
La citotoxicidad es la cualidad de algunas células
para ser tóxicas frente a otras que están alteradas.
La citotoxicidad constituye uno de los
mecanismos efectores de ciertas poblaciones
celulares especializadas del sistema inmunitario,
consistente en la capacidad para interaccionar con
otras células y destruirlas.
Sustancias que son tóxicas para las células; pueden
estar involucradas en la inmunidad o pueden estar
contenidos en los venenos. Estos se distinguen de
los agentes citostáticos en el grado de efecto.
Algunos de ellos se usan como antibióticos
citotóxicos.Ejemplos de agentes tóxicos son
algunas sustancias químicas, ciertas células del
sistemainmune.
Ejemplos de especies con venenos citotóxicos son
la víbora bufadora (Bitis arietans) y la
araña Loxosceles reclusa.
La citotoxicidad puede medirse por el test MTT,
test Trypan blue (TB), test de la sulforhodamina
B (SRB), test WST, test clonogénico. La
citotoxicidad constituye uno de los mecanismos
efectores de determinadas poblaciones celulares
especializadas del sistema inmunitario, consistente
en la capacidad para interaccionar con otras
células y destruirlas. Diferentes tipos de leucocitos
pueden presentar cierto grado de actividad
citotóxica en ensayos in vitro, pero se consideran
como prototipos de las células especializadas en
dicha función a una subpoblación de linfocitos T
(Tc, CTL) y a las células Natural Killer (NK). La
función citotóxica exige el metabolismo activo de
la célula a temperatura fisiológica, no implica la
síntesis de proteínas y requiere tanto la presencia
de cationes divalentes (Ca2+ y Mg2+) como la
integridad del citoesqueleto, inhibiéndose en
presencia de agentes farmacológicos como la
citocalasina. Las etapas en las que se desarrolla el
proceso son las siguientes:
1. Adhesión intercelular. Las células efectoras
interaccionan a través de diferentes receptoras de
superficie con estructuras en la membrana de la
diana, denominándose a estos complejos celulares
“conjugados”. Esta fase es dependiente de Mg2+,
no requiere Ca2+ en el medio y puede producirse
por debajo de la temperatura fisiológica.

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2. Activación de la célula efectora. La interacción
de los receptores de superficie con sus ligandos
determina la transducción de señales a la célula
que conllevan la generación de segundos
mensajeros, la aparición de cambios estructurales
y la exocitosis del contenido de los gránulos de
secreción al espacio intercelular, tras la fusión de
los mismos con la membrana plasmática. Por otra
parte, las mismas señales pueden activas la
biosíntesis y secreción de citocinas,
particularmente IFN y TNF.
3. Fase de impacto lítico (lethal hit). Viene
determinada por la acción de ciertos componentes
de la célula efectora sobre la diana, la cual
experimenta una serie de complejas interacciones
que inician su desestructuración. Tanto esta etapa
como la anterior son dependientes de Ca2+ y
temperatura fisiológica. 4. Disociación del
contacto intercelular. Permite que la célula
efectora inicie potencialmente un nuevo ciclo
lítico a la par que prosigue la destrucción de la
célula diana. En la actualidad, la toxicología
alcanza enorme trascendencia social debido al
importante número de sustancias químicas
comercializadas y su posible impacto sobre la
salud pública y ambiental. Ello ha conducido al
desarrollo de estrategias de evaluación de riesgos
con fines normativos: es el caso de la llamada
“toxicología reguladora”, rama dentro de la
toxicología que se dedica a la legalización y
armonización de todos los protocolos e informes
de sustancias tóxicas a partir de normativas
legales, disposiciones ministeriales por propia
iniciativa o como cumplimiento de
recomendaciones o directrices de organismos
internacionales los cuales producen un extenso
cuerpo legal de raíz toxicológica, ampliamente
conocidas. La citotoxicidad se refiere a la tasa de
efectos tóxicos en una célula viva. Se realizan una
serie de pruebas para comprender esta relación. De
hecho, las pruebas que se evalúan midiendo la tasa
de proliferación y los efectos tóxicos en la célula
se llaman pruebas de citotoxicidad.
Estas pruebas se recogen bajo el tema principal 3.
 Pruebas con sales de tetrazolio.
 Prueba de liberación de enzimas LDH
 Forman pruebas de citotoxicidad
incluyendo métodos de luminiscencia.
Pruebas realizadas con la ayuda de sales de
tetrazolio: Las sales de tetrazolio son compuestos
que son compuestos orgánicos heterocíclicos. Se
ha sintetizado e identificado con más de miembros
de 1000 a partir de los años en que se descubrió
(Altman, 1976). Junto con la reducción de las sales
de tetrazolio al tomar electrones, también ayuda a
transformar el formazán en una estructura llamada
cambio de color. Las reacciones de color solo se
encuentran en las células vivas. Las pruebas de
tetrazolio se experimentan en tres etapas. En la
primera etapa, las células vivas están expuestas a
una cierta cantidad de sustancia tóxica. En el
segundo paso, la sustancia tóxica se elimina una de
la otra y el compuesto de tetrazolio se agrega y se
incuba durante 1-4 horas. En las últimas etapas, el
cambio de color se mide por el método
espectrofotométrico y se produce la determinación
del número de células vivas o muertas.
Prueba de liberación de enzimas LDH: otro
método utilizado en el análisis de la viabilidad
celular es la determinación de la actividad de la
lactato deshidrogenasa (LDH) liberada de las
células dañadas o muertas al medio. (Decker y
Lohmann-Matthes, 1988; Korzeniewski y
Callewaert, 1983). La lactato deshidrogenasa se

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conoce como una enzima citoplásmica que se
encuentra en todas las células. Cuando las células
están expuestas a efectos tóxicos, su integridad de
la membrana plasmática se altera y la enzima LDH
se filtra de las células y pasa al medio. Por lo tanto,
la evaluación del daño se lleva a cabo midiendo la
actividad de la enzima LDH después de la
exposición.
Métodos de luminiscencia:
Prueba de fluorescencia del azul de Alamar y otros
métodos de fluorescencia: la prueba de azul de
Alamar fue utilizada por primera vez por personas
de Erb y Ehlers (1950) para la determinación de
contaminación bacteriana en líquidos biológicos y
leche, y más tarde en el estudio de Ahmed et al.
(1950) adaptó estas pruebas como una opción
lateral a la prueba de incorporación de timidina
[1994 H] radioactiva. Este método se basa en la
conversión del compuesto llamado azul alamar
(resazurina) en el compuesto de resorufina junto
con las células vivas. La resazurina se conoce
como un colorante azul oxidativo redox, que pasa
libremente a través de la membrana celular para
ingresar a la célula, donde se reduce y se
transforma en un compuesto de resorufina rosa
fluorescente. Las células muertas no pueden
reducir la resazurina y no son capaces de generar
una señal de fluorescencia debido a la pérdida de
la actividad metabólica. La señal resultante se
detecta mediante el uso de fluorómetros y la
intensidad aumenta a medida que aumenta el
número de células viables.
Prueba de bioluminiscencia de ATP: los
abusadores de adenosina trifosfato (ATP) actúan
como fuentes de energía con sistemas biológicos y
se pueden encontrar en todas las células
metabólicamente activas. (Crouch et al., 1993).
Después de la muerte celular, el estado de síntesis
de ATP de la célula desaparece y las ATPasas
endógenas realizan una rápida degradación de la
ATP fácilmente. Por esta razón, el contenido de
ATP intracelular se ha descrito como el principal
indicador de la viabilidad celular y se está
convirtiendo en uno de los métodos de
determinación de la viabilidad. La prueba de
bioluminiscencia de ATP se ha definido como el
método más rápido, más sensible y más fácil entre
las pruebas de viabilidad realizadas en múltiples
(Lomakina et al., 2015; Riss et al., 2006).
Prueba de bioluminiscencia en tiempo real: la
mayoría de las pruebas de viabilidad tienen la
forma de un formato de punto final cuyas células
no se han destruido o no se pueden seguir
investigando, lo que hace imposible la cinética y
el análisis en tiempo real de sustancias tóxicas.
Debido a que la toxicidad es dependiente del
tiempo y de la dosis, los efectos de diferentes
rangos de dosis solo se pueden entender mediante
el estudio en diferentes momentos. Similar al
ensayo de bioluminiscencia de ATP, la enzima
luciferasa también se usó en este ensayo. Sin
embargo, la enzima luciferasa usada en este
ensayo se obtuvo de un organismo diferente.

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Conclusiones-
La célula efectora en citotôxicidad espontanea, es
una célula linfoide, con receptores Fc(7S), y se
encuentra repartida entre las fracciones Tg
Tanto leucocitos de sangre como el bazo tienen
actividad NK, mientras que esté ausente en timo y
amigdalas, ôrganos que ademés carecen de células
con receptores Fc(7S) El receptor Fc(7S), no es
necesario para llevar a cabo la citotôxicidad
esponténea, asî, células que tengan bloqueado este
receptor, como las Tg, presentan actividad NK
aunque carecen de actividad ADCC. Las células
efectoras NK, tienen morfologia de linfocitos
grandes granulares (LGL), frente a todas las lineas
diana ensayadas; las células LGL pueden
enriquecerse en un gradiente discontinue de
Percoll. La formaciôn de monocapas de células
diana no adhérentes al plastico, ha permitido la
adsorciôn de células efectoras NK, con perdida de
la actividad NK en la poblaciôn no adhérente. Por
ensayos de inhibiciôn de un sistema de
citotôxicidad ADCC con células sensibles a NK, y
por estudios de adsorciôn sobre monocapas de
células diana sensibles a NK, podemos concluir
que, las células efectoras en citotôxicidad Nk y
ADCC, pertenecen, en humanos, a la misma
poblaciôn celular.El INF aumenta la actividad
citotôxica espontSnea, y este aumento es debido al
aumento en el porcentaje de conjugados
citotôxicos. El INF no aumenta el porcenta je de
conjugados totales. El INF aumenta la velocidad
de la lisis de las células efectoras. Tras el
tratamiento con INF, los linfocitos efectoras matan
mas rapidamente a sus células diana. El INF
aumenta el rango de especificidades de la célula
efectora NK; células diana resistentes a la
citotôxicidad NK en ensayos de 4 horas, son
lisadas por los linfocitos pretratados con INF. El
efecto del INF es reversible. Linfocitos que habian
sido activados por INF, pierden la capacidad de
aumentar la citotôxicidad NK,tras un determinado
periodo de tiem po de incubaciôn, pudiendo
reactivarse con nuevo INF.
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